JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 1:59 dk. • July 8th, 2025
Kan damarı stabilitesi için gerekli olan CCM2 genini taşıyan genetiği değiştirilmiş bir fare yavrusu ile başlayın.
Bu gen iki loxP bölgesi ile çevrilidir. Yavrunun endotel hücreleri ayrıca bir östrojen reseptörüne veya ER'ye kaynaşmış Cre rekombinaz enzimini eksprese eder.
İntragastrik olarak yavruya 4-hidroksitamoksifen veya 4-HT enjekte edin.
4-HT, endotel hücrelerinden yayılır ve Cre-ER füzyon proteininin östrojen reseptör kısmına bağlanır.
Bu bağlanma, endotel hücrelerinin çekirdeğine giren ve loxP bölgelerine bağlanan Cre rekombinazı aktive eden konformasyonel bir değişikliği tetikler.
Bu, loxP bölgeleri arasındaki rekombinasyon olayını kolaylaştırır, bir döngü oluşturur ve CCM2 gen segmentini eksize eder.
CCM2 kaybı, endotel hücrelerinin bütünlüğünü bozarak kan damarı duvarlarının stabilitesini tehlikeye atar.
Bu, kırılgan ve sızıntıya eğilimli serebral kavernöz malformasyonlar veya CCM'ler olarak bilinen şişmiş anormal vasküler yapıların gelişmesine yol açar.
4-HT'yi% 100 etanol içinde mililitre başına 10 miligram konsantrasyona çözerek başlayın. 30 mikrolitrelik alikot hazırlayın ve eksi 80 santigrat derecede saklayın. Kullanım gününde, aliquoted 4-HT'yi mısır yağında mililitre başına 0.5 miligrama seyreltin. Daha sonra, deneysel CCM lezyonlarını indüklemek için P1 yenidoğan yavrularına intragastrik olarak 50 mikrolitre 4-HT enjekte etmek için bir insülin şırıngası kullanın.