Primer Embriyonik Fare Dopamin Nöronlarında Alfa-Sinüklein Birikiminin İncelenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:13 dk. • July 8th, 2025
Birincil embriyonik fare dopamin nöronlarının mikro ada kültürlerini çok kuyucuklu bir ortam içeren bir plakada alın.
Bu nöronlar, alfa-sinüklein proteininin yanlış katlanmış ve toplanmış formları olan önceden oluşturulmuş fibriller (PFF'ler) ile önceden işlenir.
PFF'ler tohum görevi görür ve endojen alfa-sinükleinin daha fazla yanlış katlanmasını ve oligomerizasyonunu tetikleyerek fosforile alfa-sinüklein fibrilleri oluşturur. Bu fibriller sonunda Lewy cisimciklerini oluşturur.
Hücresel morfolojiyi korumak için ortamı bir fiksatif ile değiştirin.
Hücreleri tampon ile yıkayın.
Hücre zarlarına nüfuz etmek için deterjan içeren bir tampon ekleyin.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir engelleme solüsyonu ekleyin.
Fosforile alfa-sinükleini hedefleyen birincil antikorları ve dopamin nöronlarında her yerde eksprese edilen bir referans proteini ekleyin.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın.
İlgili primer antikorları hedef alan florofor konjuge sekonje sekonder antikorları tanıtın.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tekrar yıkayın.
Çekirdekleri boyamak için DNA bağlayıcı bir boya ekleyin.
Bir floresan plaka tarayıcı kullanarak, sitoplazmik alfa-sinüklein agrega
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin