İskemik Fare Beyin Dokularından Hücre Süspansiyonlarının Elde Edilmesi

Beyin hücrelerini ve sızmış bağışıklık hücrelerini içeren perfüze iskemik fare beyin dokularını alın.

Mendilleri bir süzgeçte kıyın ve tampon ile durulayın.

Süzüntüyü santrifüjleyin ve süpernatanı atın.

Peletleri bir sindirim enzimi çözeltisi içinde yeniden süspanse edin ve bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın.

Sindirim enzimlerinin hücre dışı matrisi parçalaması ve hücreleri gevşetmesi için kuluçkaya yatırın.

Süspansiyonu filtreleyin ve kirletici DNA'yı çıkarmak için DNaz içeren tampon ile durulayın.

Daha sonra DNaz içermeyen tampon ile yıkayın.

Süzüntüyü santrifüjleyin ve süpernatanı atın.

Hücreleri yoğunluk gradyan ortamında yeniden askıya alın. Ardından, içeriği yeni bir tüpe aktarın ve karıştırın. Bileşenleri yoğunluğa göre ayırmak için santrifüjleyin.

Miyelin ve kalıntı içeren süpernatanı çıkarın.

Peleti DNaz içermeyen tamponda yeniden süspanse edin. Yeni bir tüpe aktarın ve tekrar santrifüjleyin.

Yoğunluk gradyan ortamının yeterli şekilde uzaklaştırılmasını sağlamak için süpernatanı atın.

Son olarak, daha fazla analiz için tampondaki hücreleri yeniden askıya alın.

5 mililitrelik bir şırınganın piston ucunu kullanarak, beyin dokusu parçalarını 100 mikronluk bir hücre süzgecinden