Parkinson Hastalığının Bir Sıçan Modelinde Levodopa ile İndüklenen Diskinezilerin İndüksiyonu

Levodopa, bir dopamin öncüsü ve bir dopamin dönüşüm inhibitörü ile dolu bir şırınga alın.

Bu çözeltiyi, Parkinson hastalığı olan ve hasarlı dopamin üreten nöronlar sergileyen kısıtlı bir sıçanın deri altı dokusuna enjekte edin.

Sıçanlarda, inhibitör dopamin üreten enzimlere bağlanır ve levodopa'nın dopamine erken dönüşümünü önler.

Levodopa kan dolaşımına girer, amino asit kanalları yoluyla kan-beyin bariyerini geçer ve hasar görmemiş dopamin üreten nöronlara girer.

Bu nöronlardaki enzimler, levodopayı uyarıcı bir nörotransmitter olan dopamine dönüştürür ve onu sinapsa bırakır.

Dopamin, post-sinaptik nöronlar üzerindeki reseptörlerine bağlanarak sinyal iletimini tetikler.

Dopamin üretimini artırmak için enjeksiyonları periyodik olarak tekrarlayın.

Zamanla, aşırı dopamin, reseptörlerinin aşırı uyarılmasına ve aşırı nöronal sinyalleşmeye yol açar ve bu da sonunda farenin vücut hareketlerini bozar.

Fareyi bir kafese yerleştirin ve davranışını gözlemleyin. Sıçan, levodopa tarafından indüklenen diskineziler olarak bilinen istemsiz, tekrarlayan vücut hareketleri sergiler.

L-DOPA enjeksiyonundan önce, kehribar şişesindeki önceden tartılmış, liyofilize L-DOPA ve benserazid karışımına uygun hacimde steril salin ekleyin ve 10 saniye boyunca iyice çalkalayın. Hazırlıktan hemen sonra, her hayvan için gerekli hacimde L-DOPA-benserazid karışımını 26 gauge iğne ile monte edilmiş ayrı şırıngalara doldurun ve her şırıngayı ayrı bir hayvan kimliği ile etiketleyin.

İlk kafesi enjeksiyon tezgahına getirdikten sonra, fareyi enjeksiyon yüzeyine yerleştirmek için kafesinden çıkarın. Avuç içi yüzeye değecek şekilde farenin başını ve omuzlarını tutmak için baskın olmayan elinizi kullanın ve başparmak ve işaret parmağınızla kürek kemiğinin üzerine sırttaki cildi sıkın. Kas içi enjeksiyonu önlemek için iğneyi vücuda paralel tutarak parmaklar arasındaki deri altı boşluğa L-DOPA hacmi enjekte etmek için baskın elinizi kullanın.

Enjeksiyondan sonra, fareyi kafesin içine taşıyın. Ardından, zamanlayıcıyı bir ila iki dakikaya ayarlayın ve tüm fareler enjekte edilene kadar her bir ila iki dakikada bir bir fareye enjekte ederek prosedürü tekrarlayın. Derecelendirme gününde, derecelendirme süresi boyunca herhangi bir davranışın sıklığını tahmin ederken, levodopa kaynaklı diskinezi veya LID davranış yoğunluğunu gözlemlemek için kafesin yanına bir zamanlayıcı yerleştirin.

LID davranışının ilk başlangıcı, tepe davranışı ve istenen sayıda zaman noktasında düşüş aşaması dahil olmak üzere distonik ve hiperkinetik diskinezi hareketlerinin yoğunluğunu ve sıklığını değerlendirin. Bir dakikalık derecelendirme aralıkları kullanıyorsanız, ilk fareyi derecelendirmek için bir dakikalık bir zamanlayıcı ayarlayın ve derecelendirmeye bir dakikalık aralıklarla tüm fareler boyunca devam edin.