JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:05 dk. • July 8th, 2025
Başı traş edilmiş halde stereotaksik bir cihaza sabitlenmiş anestezi uygulanmış bir fare ile başlayın.
Kafa derisini dezenfekte edin ve kafatasını ortaya çıkarmak için bir kesi yapın.
Bağ dokusu tabakasını çıkarmak için kafatasını temizleyin.
Kafatasındaki referans noktasını kullanarak hedef bölgeyi işaretleyin ve bir delik açın.
Stereotaksik aparata sabitlenmiş bir lizofosfatidilkolin veya LPC çözeltisi içeren bir şırınga alın.
Beynin beyaz madde bölgesindeki iki enjeksiyon noktasının koordinatlarını belirleyin ve şırıngayı buna göre konumlandırın.
LPC solüsyonunu enjekte edin ve iğneyi enjeksiyondan sonra her bölgede bir süre yerinde tutun.
Kesiği dikin ve hayvanın iyileşmesine izin verin.
Enjeksiyon bölgesinde, LPC doğrudan miyelin ile etkileşime girerek yapısını bozar ve parçalanmasına neden olur.
Bu, lokal nöronal disfonksiyona neden olur, böylece bir fokal demiyelinizasyon modeli oluşturur.
32 gauge bir iğneyi beş mikrolitrelik bir şırıngaya bağlayarak başlayın. Enjeksiyonun hazırlanması için 5 mikrolitre LPC solüsyonu çekin. Daha sonra, solunum pürüzsüzken, farenin anestezi derinliğini, ayak parmağı kıstırma refleksinin olmamasıyla onaylayın. Fareyi sırt tarafı yukarı bakacak şekilde stereotaksik bir çerçeveye yerleştirin ve kafayı bir burun konisi ve diş kelepçesi ile sabitleyin.
Fareyi iki taraflı kulak çubukları ile stereotaksik cihaza sabitleyin. Kulak çubuklarının düz olduğundan ve başın yatay ve sabit olduğundan emin olun. İyodofor ile silerek baş derisini dezenfekte edin. Ardından, kafatasını ortaya çıkarmak için kafa derisinin orta hattı boyunca yaklaşık 1,5 santimetreye kadar küçük bir kesi kesmek için neşter kullanın. Kafatasını, bregma, lambda ve arka bıngıldak açığa çıkana kadar% 1 hidrojen peroksit içine batırılmış bir pamuklu çubukla silin.
Şırıngayı stereotaksik aparatın üzerine yerleştirin. Hayvanın yatay pozisyonunu sağlayın ve korpus kallozumun yerini belirleyin. Enjeksiyon bölgesi belirlendikten sonra, koordinatları kaydedin ve kafatası üzerinde bir işaretleyici ile bir işaret yapın. İşaretli bölgeyi bir kafatası matkabı ile nazikçe delin. Herhangi bir kanama olmamasına dikkat edin.
İğneyi yavaşça verilen koordinatlara hareket ettirin. Korpus kallosum demiyelinasyonunu indüklemek için, her enjeksiyon bölgesine dakikada 0.4 mikrolitre hızında 2 mikrolitre LPC çözeltisi enjekte edin. Enjeksiyondan sonra, iğneyi her bölgede 10 dakika daha tutun. Son olarak, cildi 4-0 dikişle dikin ve hayvanın 10 dakika içinde uyanmasını bekleyin.