Sıçan hipokampal bölümünde internöronların immün boyanması

Biyotin ile konjuge bir molekül olan biyositin ile doldurulmuş bir internöron içeren sabit bir sıçan hipokampal bölümünü ele alalım.

Daha sonra, spesifik olmayan bağlanmayı önlemek ve nöronları geçirgen hale getirmek için bloke edici proteinler ve iyonik olmayan bir deterjan içeren bir çözelti ekleyin.

İnternöronlar üzerinde spesifik kanabinoid reseptörlerini hedefleyen bir primer antikor ile inkübe edin.

Fazla antikorları çıkarmak için tampon ile yıkayın.

Ardından, streptavidin ile konjuge bir floresan boya ve bir florofor konjuge ikincil antikor ekleyin.

İnkübasyon sırasında, streptavidin biyositine güçlü bir şekilde bağlanır ve biyositin dolu internöronun görselleştirilmesine izin verirken, ikincil antikor, internöronlar üzerindeki reseptöre bağlı primer antikorları hedefler.

Tampon ile durulayın, bağlanmamış molekülleri çıkarın.

Şimdi, sulu montaj ortamı kullanarak bölümü monte edin. Bir lamel yerleştirin ve kapatın.

Bir floresan mikroskobu kullanarak, biyositin dolu internöron ve kanabinoid reseptör ekspresyonunu görselleştirerek internöronun morfolojisinin ve reseptör dağılımının analizini mümkün kılın

.

Dokuları oda sıcaklığında bir saat boyunca% 10 bloke edici serum ile kili