İnsan Rektal Aspirasyon Biyopsi Kesitlerinde S-100 Proteininin İmmünohistokimyasal Boyanması

Maruz kalan protein antijenleri ve inaktive edilmiş endojen peroksidazlar ile sabit insan rektal aspirasyon biyopsi kesitleri alın.

Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir engelleme solüsyonu ekleyin.

Bloke edici solüsyonu, Hirschsprung hastalığının bir belirteci olan hedef glial hücre proteini S-100'e bağlanan birincil antikorlarla değiştirin.

Bağlanmamış antikorları çıkarın ve sinyali yükseltmek için peroksidaz polimerleri ile inkübe edin.

Fazla polimeri çıkarmak için yıkayın. Enzim polimerlerine ve birincil antikorlara bağlanan ikincil antikorlar ekleyin.

Bağlanmamış antikorları çıkarın ve kromojenik bir substrat ekleyin.

Peroksidazlar substrat ile reaksiyona girerek renkli bir çökelti oluşturur.

Fazla çökeltiyi gidermek için durulayın.

Çekirdekleri boyamak için bir boya ekleyin.

Fazla boyayı çıkarmak için bir asit-etanol çözeltisi ile yıkayın.

Daha sonra, artan konsantrasyonlarda etanol ve ardından ksilen kullanarak bölümleri kurutun.

Son olarak, hedef proteinin varlığını gösteren lekelenmeyi görselleştirmek için monte edin ve mikroskop altında gözlemleyin.

Fazla sığır serum albüminini atın ve hücreleri gece boyunca 4 santigrat derecede ilgilenilen birincil antik