JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:10 dk. • July 8th, 2025
Korteksin uyarıcı piramidal nöronlarında ışıkla aktive olan katyon kanallarını ifade eden transgenik bir fare beyninden kortikal bir dilim alın.
Dilimi bir kayıt odasına sabitleyin ve doku canlılığını korumak için yapay beyin omurilik sıvısı ile perfüze edin.
Yüzeysel kortikal tabakaya bir kayıt elektrodu yerleştirin ve temel nöronal aktiviteyi kaydedin.
Voltaj kapılı potasyum kanallarını tıkayan, potasyum çıkışını önleyen ve nöronları hipereksitabl bir durumda tutan nöbete neden olan bir ilaç tanıtın.
Hipereksitabl nöronlar, uzun bir süre boyunca kendiliğinden iktal olaylar olarak adlandırılan aksiyon potansiyeli patlamaları üretir.
İsteğe bağlı iktal olaylar oluşturmak için, uyarıcı piramidal nöronlar üzerindeki katyon kanallarını aktive etmek için kısa bir ışık darbesi uygulayın.
Ortaya çıkan katyon akışı, uyarıcı nörotransmiterlerin salınımını tetikleyen aksiyon potansiyelleri üretir.
Bu nörotransmiterler, postsinaptik nöronlar üzerindeki reseptörlere bağlanarak katyon akışına neden olur.
Akın, kısa bir süre için iktal olaylar üreten aksiyon potansiyeli patlamalarına neden olur.
Bu prosedürde, beyin diliminden biraz daha büyük olan lens kağıdını kesin. Bir diş cımbızı kullanılarak yerinde tutulan kesilen lens kağıdına bir beyin dilimi aktarmak için geniş delikli bir pipet veya detaylandırma fırçası kullanın. Ardından, beyin dilimi içeren lens kağıdını kayıt odasına aktarın ve bir arp ekranı ile yerine sabitleyin.
Daha sonra, kayıt odasındaki beyin dilimini 35 santigrat derecede karbojene ACSF ile dakikada üç mililitre hızında perfüze edin. Kayıt odasının 33 ila 36 santigrat derece olduğundan emin olmak için dijital bir termometre kullanın. Ardından, bir Hamilton şırınga kullanarak cam elektrotları 10 mikrolitre ACSF ile doldurun.
20 kez stereomikroskop altında, kayıt camı elektrodunu manuel manipülatörler kullanarak yüzeysel kortikal tabaka 2/3'e yönlendirin. Standart yazılım ile beyin diliminin elektriksel aktivitesini görüntüleyin. Elektrografik nöbet benzeri aktiviteleri indüklemek için, beyin dilimini 100 mikromolarda 4-AP içeren ACSF ile perfüze edin. Standart yazılım ile beyin diliminin elektriksel aktivitesini görüntüleyin.
Optogenetik farelerden alınan beyin dilimleri üzerinde optogenetik strateji kullanarak elektrografik nöbet benzeri olaylar oluşturmak için, 1.000 mikron çekirdek çapında bir optik fiberi doğrudan kayıt bölgesinin üzerine yerleştirmek için manuel bir manipülatör kullanın. Bir iktal olayı başlatmak için kısa bir mavi ışık darbesi uygulayın.