JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:19 dk. • July 8th, 2025
Matris kaplı bir plakada olgun insan nöronlarının yapışık bir kültürüyle başlayın.
Sarı bir floresan protein (YFP) raportörüne kaynaşmış mutant bir insan tau proteinini kodlayan lentiviral vektörler ekleyin.
Lentivirüs, spesifik nöronal hücre yüzeyi reseptörlerine bağlanarak viral-konak membran füzyonunu ve viral RNA ve enzimlerin salınmasını sağlar.
Viral RNA, DNA'ya ters kopyalanır.
Viral integraz, DNA'yı çekirdeğe taşıyarak konakçı genomuna entegrasyonu kolaylaştırır ve YFP etiketli mutant tau proteininin üretimine yol açar.
Zamanla, mutant tau, transdüksiyona uğrayan hücrelerde sitoplazmik agregatlar oluşturur.
İçselleştirilmemiş viral parçacıkları çıkarmak için hücreleri taze ortamla yıkayın.
Nöronal canlılığı korumak ve protein agregasyonunu teşvik etmek için düzenli ortam değişiklikleri ile inkübasyona devam edin.
Nöronları mikroskop altında görselleştirin.
Başarılı bir şekilde transdüksiyona uğrayan nöronlar, floresan YFP etiketli mutant tau proteininin sitoplazmik agregatlarını sergiler.
Lentivirus ile nöronları dönüştürmek için, hücre başına 340.000 aktarılabilir birim titre sayısı kullanın. Hücre kültürü ortamındaki dönüştürücü birimleri gerekli konsantrasyona seyreltin
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin