Nöronlarda Çoklu Mitokondriyal Parametrelerin Flow Sitometri Kullanılarak Ölçülmesi

0 views • 2:09 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir tüpte sabit ve geçirgen nöronları alın.

Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir engelleme tamponu ekleyin.

Süspansiyonu santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın. Ardından, nöronları tamponda yeniden askıya alın.

Süspansiyonu, etiketlenmemiş ve florofor etiketli birincil antikorlar içeren tüplere eşit olarak aktarın.

Antikorların mitokondriyal solunum zincirine veya MRC kompleks alt birimlerine, mitokondriyal DNA ile ilişkili bir proteine ve nöronlar içindeki bir mitokondriyal dış zar proteinine spesifik olarak bağlanmasına izin vererek inkübe edin.

Bağlanmamış antikorları çıkarın.

Etiketlenmemiş birincil antikorlara bağlanan florofor etiketli ikincil antikorlarla inkübe edin.

Karışımı santrifüjleyin ve süpernatanı atın.

Nöronları tamponda yeniden süspanse edin ve bunları mikrosantrifüj tüplerine aktarın.

MRC kompleks alt birimlerinin ekspresyon seviyelerine ve nispi mitokondriyal DNA seviyelerinin ölçümüne karşılık gelen etiketli nöronlar üzerindeki floresan sinyalleri tespit etmek için akış sitometrisi yapın.

Numuneleri 1 mililitre bloke edici tamponda bloke edin ve hücreleri gösterildiği gibi PBS ile santrifüjleme ile yıkayın. Farklı mitokondriyal kompleksleri ve alt birimleri tespit etmek için, hücreleri metin el yazmasında açıklanan ilgili birincil antikorlarla 30 dakika boyunca inkübe edin. Hücreleri PBS ile bir kez yıkadıktan sonra, hücreleri ikincil antikor ile 30 dakika inkübe edin.

İnkübasyonun sonunda, gösterildiği gibi PBS'deki hücreleri yıkayın ve yeniden süspanse edin. Hücre süspansiyonunu karanlıkta tutulan 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın, buz üzerinde. Ardından, akış sitometresindeki hücreleri analiz edin ve sinyalleri tespit edin ve 530/30 bant geçiren bir filtre kullanarak birini filtreleyin.

12:14

İskemik Fare Beyin gelen Bağışıklık Hücreleri İzolasyon ve Akım Sitometrisi Analizi

Related Videos

0 Views

09:44

Murine Hematopoetik Kök ve Progenitor Hücrelerde Mitokondriyal Reaktif Oksijen Türlerinin Akış Sitometrik Analizi ve MLL-AF9 Tahrikli Lösemi

Related Videos

0 Views

13:53

Aktinomisin D ile Tedavi Edilen SiHa Serviks Kanseri Hücrelerinde Apoptotik Biyobelirteçlerin Akış Sitometrik Analizi

Related Videos

0 Views

15:09

Parkinson Hastalığı Alanında Mitokondriyal Fenotiplerinin İzleme İlköğretim İnsan Fibroblast Kullanımı

Related Videos

0 Views

11:53

İzole Mitokondri Akış Sitometrisi ile Dış Zar Proteinleri imüno

Related Videos

0 Views

06:22

Çok renkli akış sitometresi tabanlı Quantification mitokondri ve T hücrelerde organellerin

Related Videos

0 Views

07:17

Efflux pompaları Inhibisyonu Ile hematopoetik kök ve progenitor hücrelerde mitokondriyal membran potansiyelinin akış Cytometrik değerlendirilmesi doğruluğu iyileştirilmesi

Related Videos

0 Views

10:24

Farklı Homojenizasyon Yöntemleri ile Fare Beyin/Omurilikten Alınan Çoklu Hücre Tiplerinin Eşzamanlı Akış Sitometrik Karakterizasyonu

Related Videos

0 Views

07:57

Hematopoetik Kök Hücrelerde ve T-Hücrelerinde Mitokondriyal Kitle ve Membran Potansiyelinin Akış Sitometrisi ile Ölçülmesi

Related Videos

0 Views

07:32

Kalıtsal Spastik Paraplejide İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Nöronlarda Mitokondriyal Taşıma ve Morfolojinin Analizi

Related Videos

0 Views

Last updated: 27 June 2026