JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:09 dk. • July 8th, 2025
Bir tüpte sabit ve geçirgen nöronları alın.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir engelleme tamponu ekleyin.
Süspansiyonu santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın. Ardından, nöronları tamponda yeniden askıya alın.
Süspansiyonu, etiketlenmemiş ve florofor etiketli birincil antikorlar içeren tüplere eşit olarak aktarın.
Antikorların mitokondriyal solunum zincirine veya MRC kompleks alt birimlerine, mitokondriyal DNA ile ilişkili bir proteine ve nöronlar içindeki bir mitokondriyal dış zar proteinine spesifik olarak bağlanmasına izin vererek inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarın.
Etiketlenmemiş birincil antikorlara bağlanan florofor etiketli ikincil antikorlarla inkübe edin.
Karışımı santrifüjleyin ve süpernatanı atın.
Nöronları tamponda yeniden süspanse edin ve bunları mikrosantrifüj tüplerine aktarın.
MRC kompleks alt birimlerinin ekspresyon seviyelerine ve nispi mitokondriyal DNA seviyelerinin ölçümüne karşılık gelen etiketli nöronlar üzerindeki floresan sinyalleri tespit etmek için akış sitometrisi yapın.
Numuneleri 1 mililitre bloke edici tamponda bloke edin ve hücreleri gösterildiği gibi PBS ile santrifüjleme ile yıkayın. Farklı mitokondriyal kompleksleri ve
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin