İn Vivo Çalışmalar için Medial Ganglionik Eminence Hücrelerinin Viral Aracılı Etiketlenmesi ve Transplantasyonu

Genetik olarak değiştirilmiş fare embriyolarından kortikal internöron progenitörleri içeren medial ganglionik eminence dokusunu hasat edin.

Katyonik bir polimer ekleyin ve dokuyu tek hücreli bir süspansiyona ayırın.

Lox bölgeleri ile çevrili Cre rekombinaz bağımlı bir GFP raportörü taşıyan lentiviral vektörler ekleyin. Kuluçkaya yatmak.

Polimer, viral ve konak hücre zarı yüklerini nötralize ederek viral füzyon ve RNA salınımını sağlar.

Viral RNA ters kopyalanır ve konakçı genomuna entegre edilir.

Süpernatanı santrifüjleyin ve atın. Fazla medyayı emdirin.

Hücreleri hidrofobik bir yüzeye aktarın ve bir enjeksiyon cihazına yükleyin.

Hücreleri anestezi uygulanmış bir fare yavrusunun korteksine enjekte edin.

Yavrunun iyileşmesine ve büyümesine izin verin.

Nakledilen progenitörler, kortekste olgun internöronlara farklılaşır.

Bu internöronların bir alt grubu, Cre rekombinaz ve RFP'yi birlikte eksprese eder.

Bu internöronlarda, Cre lox bölgelerini eksize eder, GFP genini çevirir ve ekspresyonunu sağlar.

Cre eksprese eden internöronları tanımlamak için RFP ve GFP ortak ekspresyonunu görselleştirin.

Lentivirüs hazırlandıktan ve MGE'yi yazılı protokoldeki talimatlara göre diseke ettikten sonr