Mikrovasküler Endotel Hücre Tek Tabakası Boyunca Lenfosit Transgrasyonunun İncelenmesi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Sinirbilim

0 görüntüleme • 3:39 dk • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre yapışmasını teşvik etmek için ECM proteinleri ile kaplanmış transwell ekleri olan bir mikroplaka alın.

İnsan beyni mikrovasküler endotel hücreleri veya HBMEC'ler , eklere ve alt bölmelere bir büyüme ortamı ekleyin.

İnkübe edin, hücrelerin yapışmasına ve tek tabaka halinde büyümesine izin verin. Bu hücreler, hücrelerin ve moleküllerin geçişini sınırlayan kan-beyin bariyeri endotelyumunu taklit ederek sıkı bağlantıları ifade eder.

Ortamı çıkarın. Eklere periferik kan mononükleer hücreleri veya PBMC'ler ve alt bölmelere bir kültür ortamı ekleyin.

PBMC lenfositlerinin endotel hücreleri ile etkileşime girmesine ve daha sonra aralarında geçmesine izin vererek inkübe edin, bu işlem transmigrasyon adı verilen bir süreçtir.

Yapışmış göç etmiş hücreleri alt bölmelere toplayarak ek parçanın altını durulayın.

Hücre nicelemesi için bir referans olarak floresan mikro boncukları tanıtın.

Süspansiyonu bir tüpe aktarın, santrifüjleyin, süpernatanı atın ve lenfositleri etiketlemek için florofor konjuge bir antikor kokteyli içinde yeniden süspanse edin.

Transmigasyon yapılan lenfositler, akış sitometrisi ile kantifikasyon için hazırdır.

Hücre kültürü eklerini bir transmigrasyon tahlili için hazırlamak için, önce her bir eke ve 96 oyuklu düz tabanlı bir plakanın bir kuyucuğuna 100 mikrolitre fibronektin çözeltisi ekleyin. 37 santigrat derecede üç saat sonra, fibronektin çözeltisini 100 mikrolitre HBMEC ile değiştirin ve hücre kültürü eklerinin alt bölmelerine 600 mikrolitre taze ECM-b ortamı ekleyin.

Daha sonra, plakaları üç ila dört gün boyunca hücre kültürü inkübatörüne geri koyun. Periferik Kan Mononükleer Hücresini veya PBMC örneğini, B27 ile takviye edilmiş RPMI ortamında mililitre başına 5 kez 10 ila 6 hücreye yeniden süspanse edin. Daha sonra, birleşik HBMEC tek katmanlarını içeren uygun sayıda hücre kültürü ekinin alt ve üst bölmelerinden ortamı aspire edin ve hücre kültürü eklerine donör başına 100 mikrolitre PBMC ekleyin ve in vitro kontrol başına 24 oyuklu bir plakanın bir kuyucuğuna ekleyin.

Hücre kültürü eklerinin alt bölmelerine 600 mikrolitre RPMI artı B27 ve in vitro kontrol kuyucuklarına 500 mikrolitre ekleyin ve plakaları altı saat boyunca hücre kültürü inkübatörüne geri koyun. İnkübasyonun sonunda, hücre kültürü eklerini çıkarmak için forseps kullanın, alt kısımları zarlara dokunmadan 400 mikrolitre PBS ile dikkatlice durulayın.

Daha sonra, 20 mikrolitre akış sayımlı florosferleri deneysel ve in vitro kontrol kuyularındaki hücrelerle iyice karıştırın ve elde edilen PBMC süspansiyonlarının 1 mililitresini uygun karşılık gelen akış sitometri tüplerine aktarın. Hücreleri santrifüjleme ile toplayın ve ilgilenilen florokrom konjuge antikorları her numuneye 100 mikrolitre akış sitometri tamponuna ekleyin. 4 santigrat derecede 30 dakika sonra, hücreleri 250 mikrolitre taze akış sitometri tamponu ile yıkayın ve peletleri analiz için uygun hacimde akış sitometri tamponunda yeniden süspanse edin.

08:52

İzolasyon ve Roman Yüzey Etiket Kombinasyon ile tanımlanır Karaciğer progenitör Alt Grupları zenginleştirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:41

Miktar monosit hicret ve köpük hücre oluşumu kronik inflamatuar koşullara sahip bireylerden

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:25

Ex Vivo Transmigration Sisteminde Lenfosit Göçünün Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:39

Göç İnsan T Lenfosit İzolasyon, Kültür ve Analiz In Vitro

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:54

Akış Koşullarında İnsan umbilikal ven endotel hücreleri ve nötrofil Transmigration Çalışmaları Kullanılması İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:36

Microfabricated Kanallar Hücre Göç Çalışması

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:26

Nötrofil Hicret altında Fizyolojik Akış sırasında endotel hücre-hücre Eklemlerinin Gerçek zamanlı Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:00

Bir kullanma Lenfosit Ekstravazasyonunun analizi İn Vitro İnsan Kan-beyin bariyeri Model

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:50

Lökosit işe kültürlü damar hücreleri ve yapışık trombositler üzerinde araştırmak için Laminar akış tabanlı deneyleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:16

Monosit altgrupları Vitro akışında altında alımı eş zamanlı çalışma

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026