JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:39 dk. • July 8th, 2025
Hücre yapışmasını teşvik etmek için ECM proteinleri ile kaplanmış transwell ekleri olan bir mikroplaka alın.
İnsan beyni mikrovasküler endotel hücreleri veya HBMEC'ler , eklere ve alt bölmelere bir büyüme ortamı ekleyin.
İnkübe edin, hücrelerin yapışmasına ve tek tabaka halinde büyümesine izin verin. Bu hücreler, hücrelerin ve moleküllerin geçişini sınırlayan kan-beyin bariyeri endotelyumunu taklit ederek sıkı bağlantıları ifade eder.
Ortamı çıkarın. Eklere periferik kan mononükleer hücreleri veya PBMC'ler ve alt bölmelere bir kültür ortamı ekleyin.
PBMC lenfositlerinin endotel hücreleri ile etkileşime girmesine ve daha sonra aralarında geçmesine izin vererek inkübe edin, bu işlem transmigrasyon adı verilen bir süreçtir.
Yapışmış göç etmiş hücreleri alt bölmelere toplayarak ek parçanın altını durulayın.
Hücre nicelemesi için bir referans olarak floresan mikro boncukları tanıtın.
Süspansiyonu bir tüpe aktarın, santrifüjleyin, süpernatanı atın ve lenfositleri etiketlemek için florofor konjuge bir antikor kokteyli içinde yeniden süspanse edin.
Transmigasyon yapılan lenfositler, akış sitometrisi ile kantifikasyon için hazırdır.
Hücre kültürü eklerini bir transmigrasyon tahlili için haz
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin