Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Sonrası Bir Sıçan Beyninde Enfarktüs Bölgesi ve Beyin Ödeminin Ölçülmesi

Sağ beyin yarımküresine kan akışını kısıtlayan orta serebral arter tıkanıklığına maruz kalan bir sıçan alın.

Azalan kan akışı beyin hücrelerini oksijenden mahrum eder, su regülasyonunu bozar, hücre şişmesine veya ödem oluşumuna neden olur ve kan-beyin bariyerinin bozulmasına yol açar.

Hasarlı hücreler sonunda ölür ve bir enfarktüs bölgesi oluşturur.

BBB bozulmasını tespit etmek için farenin kuyruk damarına mavi bir boya enjekte edin.

Beyni hasat edin, jiletle dilimleyin ve dilimleri bir redoks boya solüsyonunda inkübe edin.

Canlı hücrelerde, boya mitokondriyal dehidrojenazlarla reaksiyona girer ve redüksiyona uğrayarak canlı dokuyu kırmızıya çevirir.

Dehidrojenaz aktivitesi olmayan enfarktüslü alanlar beyaz kalır.

Yüksek çözünürlüklü görüntüler elde etmek için dilimleri tarayın.

Görüntü analiz yazılımını kullanarak, mavi boya rengini ortadan kaldırmak için mavi bir filtre uygulayın ve görüntüleri gri tonlamaya dönüştürün.

Sağlıklı siyah dokuyu enfarktüslü beyaz dokudan ayırt etmek için eşikleme uygulayın.

Enfarktüs bölgesini ve beyin ödemini etkilenmemiş kontralateral hemisferin yüzdesi olarak hesaplayın.

Başlamak için, sıçan beynini çıkarın ve 0,009 inç paslanmaz çelik kaplamasız tek kenarlı tıraş bıçağıyla 2 milimetre kalınlığında yatay bölümler kesin. Bölümleri %0,005 TTC'ye yerleştirin ve 37 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin. Ardından, beyin dokusunu mikroskop slaytlarına yerleştirin ve altı beyin diliminin 1.600 x 1.600 DPI çözünürlükte optik taramasını gerçekleştirin. Resimlere mavi bir filtre eklemek için bir fotoğraf düzenleyici kullanın.

Yazılımı açtıktan sonra şuraya gidin: Görüntü, Ayarlar, ve Kanal Karıştırıcı. Çıkış kanalı olarak Mavi'yi seçin ve Monokrom'u işaretleyin. Ardından Tamam'a tıklayın. Görüntüyü JPEG dosya biçiminde kaydedin. ImageJ sürüm 1.37'deki çokgen seçim aracını kullanarak altı beyin diliminin her birinin her yarım küresini seçin ve ayrı bir görüntü dosyası olarak kaydedin.

Enfarktüs hacmini ve beyin ödemini hesaplamak için, görüntüdeki pikselleri bir eşiğe göre beyaza veya siyaha dönüştürmek için bir makro kullanın. Ardından, tüm dosyaları kapatın ve enfarktüs hacmini ve beyin ödemini belirlemek için beyaz ve siyah piksellerin sayısını karşılaştırmak için ikinci bir makro kullanın. Ham verileri bir elektronik tabloya kopyalayın. Enfarktüs hacmini hesaplarken, ipsilateral ve kontralateral serebral hemisferlerin oranlarını kullanarak doku şişmesini düzeltin. Beyin ödemi alanlarını, etkilenmemiş kontralateral hemisferin standart alanlarının yüzdesi olarak ifade edin.