Radyo İşaretli Dopamin Kullanarak Fare Beyin Sinaptozomlarında Dopamin Alımının Ölçülmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:01 dk. • July 8th, 2025
Bir fare beyninden dopamin taşıyıcıları (DAT) içeren nöronal sinapsların sağlam presinaptik terminallerinden türetilen zara bağlı yapılar olan sinaptozomları hasat edin.
Test tüplerini ligandlar içeren tamponlarla ve referans tüplerini ligandlar ve bir DAT inhibitörü içeren tamponla doldurun.
Sinaptozomları ekleyin.
Ligandlar, dopamin parçalayıcı enzimleri ve diğer taşıyıcıları inhibe ederek dopamin bozulmasını ve spesifik olmayan alımı önler.
Etiketlenmemiş ve radyoaktif işaretli dopamini tanıtın.
Test durumunda, sinaptozomal DAT dopamini alır.
Referans durumunda, inhibitör DAT aracılı dopamin alımını önler ve sadece arka plan alımına izin verir.
Numuneleri, sinaptozomları tutan mikrofiber filtrelere ekleyin.
Bağlanmamış dopamini çıkarmak için yıkayın.
Filtreleri sintilasyon tüplerine aktarın.
Radyosensitif bir bileşik içeren sintilasyon sıvısı ekleyin.
Tüpleri bir parıldama sayacına yerleştirin.
Dopaminden gelen radyoaktif emisyonlar, bileşiği, sayaç tarafından ölçülen ışığı yaymak için uyarır.
Sinaptozomal dopamin alımını ölçmek için referansı test verilerinden çıkarın.
Bu adımda, belirlenmiş 12 adet 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne 440 mikrolitre alım tamponu, ligand ve k
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin