Görselleştirme için sıçan hipokampal dilimlerinde biyositin dolu internöronların etiketlenmesi

İnaktive edilmiş endojen peroksidazlar ile biyositin dolu internöronlar içeren sabit ve geçirgen sıçan hipokampal dilimleri alın.

Yaban turpu peroksidaz (HRP) içeren avidin-biyotin kompleksleri (ABC) ekleyin ve inkübe edin, avidinin biyositine bağlanmasına izin verin.

Bağlanmamış ABC'yi yıkayın.

Kromojenik substrat ve metal arttırıcı karışımı ekleyin, ardından inkübe edin.

Güçlendirici kontrastı iyileştirirken, substratı koyu bir çökelti oluşturmak üzere oksitleyen HRP'yi aktive etmek için hidrojen peroksit ekleyin.

Dilimleri filtre kağıdına aktarın ve fazla tamponu çıkarın. Kontrastı artırmak için osmiyum tetroksit ile tedavi edin.

Dilimleri bir sürgün üzerine yerleştirin ve monte edin. Artan etanol konsantrasyonları kullanarak bunları kurutun.

Dilimleri mutlak etanol ve propilen oksit ile yıkayın.

Dokulara sızmak için reçine ekleyin.

Dilimleri bir planşete yerleştirin ve reçineyi polimerize etmek için ısıtın. Dilimleri bir slayta aktarın, bir lamel yerleştirin ve reçineyi katılaştırın.

Işık mikroskobu kullanarak, koyu lekeli biyositin dolu internöronları görselleştirin.

Bölümleri PBS içeren temiz bir cam şişeye yerleştirin. HRP reaksiyon ürününü amplifiye etmek için önce bölümler