Sıçan Beyin Bölümlerinde RNA Ekspresyonunu İncelemek için Oligonükleotid Probları Kullanılarak Yerinde Hibridizasyon

Serotonin sendromlu bir sıçandan sabit beyin kesitleri alın, bu da nöronlarda serotonin reseptörü RNA sentezinin değişmesine yol açar.

Alkol kullanarak dokuyu kurutun. Endojen hidrolize edici enzimleri devre dışı bırakmak için bir ön işlem solüsyonu uygulayın ve bunların tespit reaktifleri ile etkileşimlerini önleyin.

Fiksasyonun neden olduğu çapraz bağları kırmak için bir kaynar tampon ile muamele edin ve hedef RNA'ları açığa çıkarın.

Dokuyu kurutun, hidrofobik bir bariyer çizin ve hücresel zarlara nüfuz etmek için bir çözelti ile inkübe edin.

Oligonükleotid probları ekleyin ve inkübe edin, probların hedef RNA'larla hibritleşmesine izin verin.

Bağlanmamış probları çıkarmak için yıkayın, ardından oligonükleotid problarına bağlanan ön yükseltici, amplifikatör ve enzim konjuge etiket probları içeren amplifikasyon reaktifleri ile inkübe edin.

Enzim konjuge problar tarafından hidrolize edilen ve görünür renk üreten kromojenik substratlarla inkübe edin.

Doku şeffaflığını artırmak için ksilen ile muamele edin, bir montaj ortamı ekleyin ve bir lamel uygulayın.

Mikroskop altında, dokudaki renkli noktalar hedef RNA ekspresyonunu ölçmeye yardımcı olur.

Bu prosedürde, dehidrasyon için, negati