JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:08 dk. • July 8th, 2025
Kültürlenmiş miyelinli motor nöronlar, kas kontrol eden sinir hücreleri ve miyotüpler, çok çekirdekli kas hücreleri içeren bir plaka ile başlayın.
Motor nöron, sinyal iletimi için bir bölge olan nöromüsküler bir kavşak veya NMJ aracılığıyla miyotüp ile bağlanır.
Kuyuya kalsiyum klorür ekleyin.
Canlı görüntüleme için ters çevrilmiş bir mikroskop altında gözlemleyin ve bir film kaydedin.
Kalsiyum iyonları motor nörona girer ve uyarıcı bir nörotransmitter olan asetilkolin veya ACh salınımını tetikler.
Bu nörotransmiterler, miyotüpler üzerindeki ACh reseptörlerine bağlanarak sodyum iyonlarının girmesine izin verir ve miyotüplerin kasılmasını tetikler.
Filmi kaydedin. Yazılım daha sonra miyotüp kasılmaları için renk kodlu bir zaman-hareket grafiği oluşturur, burada kırmızı renk en yüksek hızı ve mavi en yavaş hızı temsil eder.
Ardından, ACh reseptörlerine bağlanan bir nöromüsküler bloker tanıtın. Bu, sodyum akışını önler ve miyotüp kasılmalarını kısıtlar.
Filmi yeniden kaydedin. Kırmızı renkteki bir azalma, miyotüp kasılmalarında bir azalma olduğunu gösterir.
Miyotüp kasılmalarını tetiklemek için, farklılaşmış nöromüsküler kavşak hücrelerinin her bir oyuğuna 25 milimolar kalsiyum klorür ekleyin. Ve tedaviden bir ila iki dakika sonra, plakayı ters çevrilmiş bir mikroskop tablasına yerleştirin. Canlı hücre mikroskobu kullanarak, 20 saniye boyunca miyotüp kasılmasının bir filmini kaydedin. Kaydın sonunda, kültür ortamına mililitre kürare başına 300 nanogram ekleyin ve film dosyasını analiz için uygun bir hareket vektörü analizi yazılım programında açmadan önce filmi 20 saniye daha kaydedin.