JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:38 dk. • July 8th, 2025
Farklı sertlikteki hidrojellerle kaplanmış lameller üzerinde büyütülen yapışık nöral krest hücre kültürlerini alın. Hücreleri tampon ile yıkayın.
Hücreleri sabitlemek ve hücresel morfolojiyi korumak için paraformaldehit ekleyin.
Fazla paraformaldehiti gidermek için hücreleri tamponla yıkayın.
Ardından, hücre zarlarına nüfuz etmek için iyonik olmayan bir deterjan ekleyin.
Fazla deterjanı çıkarmak için hücreleri tamponla yıkayın.
Ardından, spesifik olmayan bağlamayı önlemek için bir engelleme çözümü sunun.
Hücreleri, aktin filamentlerine bağlanan yüksek afiniteli filamentli bir aktin probu ile inkübe edin.
Bağlanmamış probları çıkarmak için hücreleri tamponla yıkayın.
Çekirdekleri lekelemek için bir floresan nükleer boya ekleyin, ardından fazla boyayı çıkarmak için tamponla yıkayın.
Lamellere montaj ortamı uygulayın ve lekeli hücreleri bir floresan mikroskobu altında inceleyin.
Daha sert hidrojeller üzerinde yetiştirilen hücreler, daha yumuşak hidrojeller üzerinde yetiştirilenlere göre daha fazla aktin filament oluşumu ve daha yayılmış bir morfoloji gösterir.
Doğrudan plaka üzerinde büyütülen hücrelerden gelen yanlış sinyalleri en aza indirmek için lamelleri yeni bir plakaya taşımak
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin