Aşağı akış analizi için bir fare beyninin işlenmesi

Taze hasat edilmiş bir fare beynini alın ve hızlı doku koruması için önceden soğutulmuş izopentan içinde hızlı dondurun.

Daha sonra, dilimleme sırasında soğuk bir ortamı korumak için beyni, korteks tarafı yukarı bakacak şekilde donmuş bir beyin matrisine aktarın.

Beynin matris sıcaklığına dengelenmesine izin verin. Simetrik kesitler sağlamak için matriste sagital ve transvers sinüsler boyunca hizalayın.

Soğutulmuş bıçakları beyne yerleştirin ve doğru hizalamayı sağlayın.

Ardından, tek tip beyin bölümleri elde etmek için bunları eşit şekilde aşağı bastırın.

Bıçakları bölümleriyle birlikte çıkarın ve rostral tarafı yukarı bakacak şekilde donmuş bir cam plaka üzerine yerleştirin.

Rostraldan kaudal oryantasyona kadar olan bölümleri doğru anatomik sırayla düzenleyin. Şimdi onları ayırın.

Uygun bir beyin referansı kullanarak, ilgilenilen bölgeyi bulun ve bölümden çıkarın.

Eksize edilen dokuyu aşağı akış analizi için önceden soğutulmuş bir şişeye aktarın.

Ötenazi uygulanmış yetişkin CD-1 vahşi tip farelerden beyinleri çıkardıktan sonra, dokuyu kuru buzla önceden soğutulmuş sıvı nitrojen veya izopentan içinde 60 saniye dondurun ve -80 santigrat derecede saklayın.

Dokuyu incelemeden 24 saat