JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:10 dk • July 8th, 2025
Sığır kuyruğundan omurlar arasında yer alan yastık benzeri bir yapı olan intervertebral diski (IVD) alın.
Dikey olarak konumlandırın ve proinflamatuar bir sitokin olan rekombinant TNF-α'yi jel benzeri çekirdek olan nucleus pulposus'a (NP) enjekte edin.
Şırıngayı yarıya kadar çekin ve TNF α geri akışını önleyerek bir vakum oluşturmak için pistonu çekin. Ardından şırıngayı çıkarın.
IVD'yi ortam içeren bir biyoreaktör odasına yerleştirin ve günlük olarak yoğun bir basınç yükü uygulayın.
TNF-α, NP hücreleri üzerindeki reseptörlerine bağlanarak bir sinyal kaskadını tetikler.
Bu, hücresel proteinleri bozan ve apoptozu indükleyen başlatıcı ve uygulayıcı kaspazları aktive eder.
TNF-α ayrıca, enflamatuar gen ekspresyonunu indükleyen ve IVD'nin hücre dışı matrisini bozan enzimlerin salınmasına yol açan transkripsiyon faktörü NF-κB'yi aktive eder.
Ek olarak, yoğun basınç yükü mekanik strese neden olarak IVD'yi daha da düşürür.
Bu, tedavi edilmemiş kontrollere kıyasla IVD'nin yüksekliğini azaltır ve erken evre IVD hastalığının dejeneratif ve proinflamatuar bir modelini oluşturur.
Birinci günkü ilk dinamik yükleme döngüsünden sonra, IVD'leri doğrudan dikey konumda bir Petri kabına yerleştirin ve bir cımbız ile sabitleyin. Rekombinant TNF alfa'yı 30 gauge insülin iğnesi ile dakikada yaklaşık 70 mikrolitre hızında patolojik grubun IVD'lerine yavaşça enjekte edin. Enjekte ettikten sonra, şırıngayı yarıya kadar geri çekin ve enjekte edilen solüsyonun sızmasını önleyen bir vakum oluşturmak için pistonu çekin. Ardından, şırıngayı IVD'den tamamen çıkarın.