Fare Beyin Dokusundan Hücre Zarı Proteinlerinin Palmitoilasyon Durumunun Değerlendirilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:45 dk. • July 8th, 2025
Fare beyin dokusundan hücre zarı proteinlerini alın.
Bu proteinler, sistein kalıntılarına bağlı bir yağ asidi olan palmitoil grupları ile translasyon sonrası modifikasyon sergiler.
Bir indirgeyici tampon ekleyin ve palmitoillenmemiş sisteinler arasındaki bağları koparmak ve onları açığa çıkarmak için yüksek bir sıcaklıkta inkübe edin.
Açıkta kalan sisteinlere bağlanan ve sadece palmitoillenmiş sisteinleri reaktif bırakan bir bloke edici reaktif ile inkübe edin.
Çözeltiyi aktarın, kloroform, metanol ve deiyonize su ile karıştırın, proteinleri çökeltmek için santrifüjleyin ve safsızlıkları giderin. Ardından, metanol, santrifüj ekleyin ve kalan kirleticileri atın.
Bir tampon ekleyin, peleti çözündürmek için sonikat yapın, ardından çözünmeyen malzemeleri santrifüjleyin ve çıkarın.
Palmitoillenmiş sisteinlerden palmitoil gruplarını çıkarmak için bir yarma reaktifi uygulayın.
Kloroform-metanol çökeltmesini tekrarlayın ve safsızlıkları giderin.
Bloke edilmemiş sisteinlere bağlanan ve palmitoillenmiş proteinleri tanımlamaya yardımcı olan bir polimer ile inkübe edin.
Kloroform-metanol çökeltme işlemini tekrarlayın ve bağlanmamış polimerleri çıkarın.
İzole edilen proteinlerin palmitoilasyon
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin