JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 3:08 dk • July 8th, 2025
Biyouyumlu bir polimer ile karıştırılmış nörotoksik amiloid-beta salgılayan hücrelerin bir süspansiyonunu alın.
Süspansiyonlu şırıngayı bir mikro boncuk üretim cihazına takın, ardından sürekli bir sıvı akışı olarak itin.
Cihazdaki bir titreşim frekansı, akışı düzgün, mikron boyutunda damlacıklar halinde keser.
Bu damlacıklar elektrostatik bir alandan geçer ve birbirlerini itmek için düzgün yükler alarak birleşmeyi önler.
Damlacıklar daha sonra kalsiyum iyonları içeren bir jelleşme banyosuna düşer. İyonlar polimeri çapraz bağlar ve hücreleri küresel mikro boncuklar halinde kapsüller.
Jelleşmeyi tamamlamak için boncukları inkübe edin, ardından bir filtre üzerinde toplayın.
Filtreyi bir tüp üzerinde ters çevirin, boncukları tüpe yıkamak için bir kültür ortamı ekleyin ve süspansiyonu ortamı içeren bir şişeye aktarın.
Polimer matris, Alzheimer hastalıklı bir beyinde görülen kronik birikimi taklit ederek amiloid-beta'nın yavaş salınımını sağlarken hücre proliferasyonunu desteklemek için besin erişimine izin verir.
Mikroboncukları üretmek için, 20 mililitrelik bir şırıngaya, beş mililitre hücre aljinat süspansiyonu yükleyin ve kapsülleyiciye bir şırınga takın. Kapsülleyiciyi başlatmak için, hücre aljinat süspansiyonunu besleyiciden itecek akışı etkinleştirin ve nozuldan bir damlacık akışı ekstrüde edilecektir. İlk düzgün olmayan akışı önlemek için ilk bir mililitreyi atık beherde toplayın. Ardından, kalan dört mililitreyi çalıştırmaya devam edin ve damlacıkların kalsiyum klorür jelleşme banyosuna düşmesine izin verin.
Jelleşme banyosu ile temas ettiğinde, damlacıklardaki aljinat, jelleşme banyosundaki kalsiyum iyonları ile anında çapraz bağlanarak küresel mikro boncuklar oluşturur. Bir dakika sonra, jelleşme kabını manyetik platformdan çıkarın ve mikro boncukların oda sıcaklığında jelleşmelerini tamamlamak için çalkalama olmadan dört dakika daha dinlenmelerine izin verin. Mikro boncukları almak için, önce büyük aljinat kalıntılarını veya artefaktlarını temizlemek için bir çift steril cımbız kullanın. Plastik bir pipetin ucunu kestikten sonra, mikro boncukları jelasyon banyosundan bir atık kabı üzerinde tutulan 74 mikrometrelik bir ağ filtreye aktarmak için kullanın.
Başarıyı sağlamak için, mikro boncuklara zarar vermemek için her zaman plastik bir pipetin ucunu kesiyoruz ve bunu, kapsüllemeden sonra boncukları bir kaptan diğerine her aktardığımızda yapıyoruz.
Ağ filtreyi bir santrifüj tüpü üzerinde ters çevirin. Boncukları tüpten aşağı yıkamak için üzerine uygun kültür ortamını pipetleyin ve bu ortamda beş dakika boyunca dengelenmelerine izin verin. Daha sonra, bunları inkübasyon ve daha sonraki deneyler için daha önce uygun ortamla doldurulmuş bir şişeye aktarın.
Bu makale, biyouyumlu bir polimer kullanarak nörotoksik amiloid-beta hücrelerini kapsülleyen mikroboncukların üretilmesi için bir yöntemi açıklamaktadır. Bu işlem, Alzheimer hastalığında görülen kronik amiloid-beta birikimini taklit ederek kontrollü salınıma ve hücre proliferasyonuna olanak tanır.
Amyloid-beta salan polimer mikroboncukların kontrollü üretimi, Alzheimer araştırmalarında kronik nörotoksik birikimin hastalıkla ilişkili modellenmesini sağlar. Bu sistem, nörodejeneratif hastalık portföyleri için erken aşama hedef doğrulama ve mekanistik risk azaltma süreçlerinde öngörülebilir bir güven sağlar. Bu yaklaşım, terapötik hipotezlerin değerlendirilmesi ve müdahalelerin fizyolojik olarak ilgili bir bağlamda taranması için ölçeklenebilir ve tekrarlanabilir bir platform sunar.
Bu mikroboncuk üretim yöntemi, keşiften preklinik aşamaya kadar olan sürece entegre olarak amiloid-beta toksisitesinin hipotez testlerini, taramalarını ve translasyonel modellemesini mümkün kılar.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 22 Ağustos 2026