JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:08 dk. • July 8th, 2025
Nöromüsküler kavşaklar veya NMJ'ler oluşturmak için motor nöronlar tarafından innerve edilen kaslardan oluşan Drosophila larvalarının vücut duvarını alın.
NMJ'deki postsinaptik kas zarı, birincil antikorlarla işaretlenmiş etkileşimli zara bağlı proteinleri içerir.
Tek sarmallı oligonükleotidlere konjuge edilmiş ikincil antikorlar içeren yakınlık ligasyon testi veya PLA ekleyin. Probların birincil antikorlara bağlanması için inkübe edin.
Bağlanmamış probları yıkayın.
Bağlayıcı oligonükleotidler ve ligaz enzimleri içeren ligasyon tamponu ile inkübe edin.
Etkileşen proteinlerin yakınlığı, problara konektör bağlanmasını kolaylaştırır. Ligaz daha sonra boşlukları kapatarak dairesel DNA oluşturur.
Bağlanmamış konektörleri yıkayın.
Dairesel DNA'yı yuvarlanan daire amplifikasyonu yoluyla amplifiye eden polimeraz içeren bir amplifikasyon çözeltisi ile inkübe edin.
Çözeltideki florofor etiketli dedektör probları, amplifiye edilmiş DNA'ya tavlanır ve uyarılma üzerine bir floresan sinyali üretir.
NMJ'de floresan olarak etiketlenmiş protein-protein etkileşimlerini görselleştirmek için vücut duvarını bir slayt üzerine monte edin.
Teste başlamak için, vücut duvarlarına% 1 BSA'da hem PLA probu ant
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin