İzole Mitokondrinin Kalsiyum Tutma Kapasitesinin Belirlenmesi

0 görüntüleme2:42 dk • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nöroblastom hücrelerinden izole edilen mitokondriyi, zar geçirimsiz, kalsiyum bağlayıcı floresan boya içeren bir tampona yerleştirin.

Mitokondrinin tamponda stabilize olmasına izin vermek için inkübe edin.

Kalsiyum içeren tampon ekleyin ve çalkalanarak inkübe edin.

Kalsiyum iyonları boya moleküllerine bağlanarak floresanslarına neden olur.

Bir floresan spektrometresi kullanarak boyanın floresansını gerçek zamanlı olarak izleyin.

Şimdi, düzenli aralıklarla kalsiyum içeren tampon enjekte edin.

Artan kalsiyum konsantrasyonu, mitokondriyal kalsiyum alımını teşvik ederek boyaya bağlanmak için mevcut serbest kalsiyum iyonlarını azaltır, bu da floresansın azalmasına neden olur.

Mitokondri maksimum kalsiyum depolama kapasitesine ulaştığında, daha fazla kalsiyum ilavesi mitokondriyal geçirgenlik geçiş gözeneğinin (mPTP) açılmasını tetikler.

Bu gözenek açıklığı, mitokondriden kalsiyumu tampona salar, burada boyaya bağlanır ve floresansın artmasına neden olur.

Mitokondriyal kalsiyum tutma kapasitesini yansıtan mPTP açılmasını indüklemek için gereken toplam kalsiyum miktarını belirleyin.

Potasyum klorür ortamını hazırlayın ve deneyden önce kalsiyum bağlayıcı yeşil floresan boyayı 0.5 mikromolar nihai konsantrasyona ekleyin. Mitokondriyal kalsiyum tutma kapasitesini belirlemek için, önce 0.5 mikromolar kalsiyum bağlayıcı yeşil floresan boya içeren potasyum klorür ortamında 1 mililitre izole mitokondriyi 6 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna aktarın.

Mitokondriyi, oda sıcaklığında 6 oyuklu plakadaki kalsiyum bağlayıcı yeşil floresan boyada inkübe edin. 1 dakika boyunca ortam ışığından koruyun. İnkübasyonun ardından, miligram mitokondriyal protein başına 200 nanomol kalsiyum eklemek için otomatik dağıtım ayarını kullanarak, 6 oyuklu plakanın her bir oyuğuna 20 milimolar kalsiyum klorür çözeltisinin 4 mikrolitre alikotunu ekleyin.

506 nanometre uyarma dalga boyu ve 531 nanometre emisyon dalga boyu ile 2 dakika boyunca her üç saniyede bir floresan değişikliklerini izlemek için bir floresan spektrometresi kullanın. Plaka, yazılım tarafından kontrol edilen okumalar arasında 3 saniye boyunca 600 RPM'de çalkalama ile donatılmıştır. Her oyuğa ilave bir 4 mikrolitre 20 milimolar kalsiyum klorür çözeltisi ekleyin, ardından floresan değişikliklerini her 3 saniyede bir 2 dakika boyunca izleyin.

08:43

Floresan Mikroskopi Canlı hücreler Potansiyel Mitokondriyal Kalsiyum ve Mitokondriyal Membran Eşzamanlı Ölçümü

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:29

Mitokondrial kalsiyum akını izole mitokondri ve kültürlü hücreleri analizleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:46

Genetik Olarak Kodlanmış Ca2+ Göstergeleri (GECI'ler) Kullanarak Astrositlerde ve Nöronlarda Mitokondriyal Ca2+ Alımı Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:45

İskelet Kası Mitokondrial İzolasyon

İlgili videolar

0 Görüntüler

13:42

Mitokondri İzole Fare Heart Geçirgenliği Geçiş Gözenek Açma Multi-parametre ölçümü

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:13

Mitokondriyal Kalsiyum Alım Testi: İzole Mitokondride Kalsiyum Alımını Ölçmek İçin Plaka Okuyucu Tabanlı Bir Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:46

Kültürlenmiş Hücrelerde Mitokondriyal Kalsiyum Alımını Ölçmek için Kalsiyum Akışı Testi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:12

Yüksek Verimli Mikroplate Solunum Ölçümler için Fare İskelet Kası Minimal Miktarları gelen Mitokondri İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:25

Yüksek çözünürlüklü Solunum Ölçümleri için Diferansiyel Santrifüj tarafından İskelet Kası Bozulmamış Mitokondri izolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:53

Mitokondrial Ca2 + saklama kapasitesi tahlil ve Ca2 +-mitokondrial şişme tahlil tetiklenen

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026