JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:42 dk. • July 8th, 2025
Nöroblastom hücrelerinden izole edilen mitokondriyi, zar geçirimsiz, kalsiyum bağlayıcı floresan boya içeren bir tampona yerleştirin.
Mitokondrinin tamponda stabilize olmasına izin vermek için inkübe edin.
Kalsiyum içeren tampon ekleyin ve çalkalanarak inkübe edin.
Kalsiyum iyonları boya moleküllerine bağlanarak floresanslarına neden olur.
Bir floresan spektrometresi kullanarak boyanın floresansını gerçek zamanlı olarak izleyin.
Şimdi, düzenli aralıklarla kalsiyum içeren tampon enjekte edin.
Artan kalsiyum konsantrasyonu, mitokondriyal kalsiyum alımını teşvik ederek boyaya bağlanmak için mevcut serbest kalsiyum iyonlarını azaltır, bu da floresansın azalmasına neden olur.
Mitokondri maksimum kalsiyum depolama kapasitesine ulaştığında, daha fazla kalsiyum ilavesi mitokondriyal geçirgenlik geçiş gözeneğinin (mPTP) açılmasını tetikler.
Bu gözenek açıklığı, mitokondriden kalsiyumu tampona salar, burada boyaya bağlanır ve floresansın artmasına neden olur.
Mitokondriyal kalsiyum tutma kapasitesini yansıtan mPTP açılmasını indüklemek için gereken toplam kalsiyum miktarını belirleyin.
Potasyum klorür ortamını hazırlayın ve deneyden önce kalsiyum bağlayıcı yeşil floresan boyayı 0.5 mikromola
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin