JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:42 dk. • April 29th, 2025
Dopamin sentezi için anahtar bir enzim olan tirozin hidroksilazı eksprese eden dopamin nöronlarını içeren fare beyin dokusu bölümleriyle polimer kaplı bir slayt alın.
Düzgün boyama sağlamak için bölümleri hidrofobik bir kalemle ana hatlarıyla belirtin.
Doku morfolojisini korumak için dokuyu bir aseton-metanol çözeltisine sabitleyin.
Hücre zarlarını geçirgen hale getirmek için deterjan içeren tamponla durulayın.
Dopamin nöronlarında tirozin hidroksilazı hedefleyen birincil antikorlarla inkübe edin, ardından bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın.
Floresan boya etiketli ikincil antikorlar, nükleer boya ve RNaz inhibitörleri ekleyin.
İnkübasyon sırasında, ikincil antikorlar birincil antikorlara bağlanır, nükleer boyalar çekirdeği etiketler ve RNaz inhibitörleri RNazları inaktive eder.
Tampon ile durulayın. Ardından, doku bölümlerini artan etanol konsantrasyonlarında dehidre edin.
Dokuyu temizlemek için ksilen içinde inkübe edin.
İşlenen doku kesitleri artık hedef dopamin nöronlarının hassas bir şekilde görüntülenmesine ve diseksiyonuna izin veren lazer yakalama mikrodiseksiyonu için hazırdır.
İmmünohistokimyayı gerçekleştirmek için, dokuyu özetlemek ve kurumasını sağlamak için hidrofo
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin