JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:13 dk. • April 28th, 2025
Karanlıkta adapte olmuş, anestezi uygulanmış, transgenik, beyaz gözlü bir sinek alın.
Sinek, gözün fotoreseptörlerindeki eGFP etiketli TRPL iyon kanallarını ifade eder.
Karanlıkta, TRPL, fotoreseptörlerin mikrovillusu olan rabdomeresin zarlarına lokalize olur.
Basınçlı hava kullanarak, sineği bir pipet ucuna baş üstü itin.
Ucu kesin ve sineği geriye doğru itin.
Tekrar kırpın ve sineği sadece başı dışarı çıkana kadar ileri doğru itin.
Bir slayta yapıştırılmış modelleme kilinin ucunu hareketsiz hale getirin ve göz radyal olarak mikroskop objektifine bakacak şekilde bir floresan mikroskop aşamasına yerleştirin.
Objektife bir damla su ekleyin, ardından göze değene kadar indirin.
Fotoreseptörlerin görüntülerini yakalayın.
Rabdomarelerdeki, hücre gövdesindeki ve arka plandaki floresan yoğunluklarını ölçün.
Hücre gövdesine TRPL translokasyonunu indüklemek için sineği turuncu ışıkla aydınlatın.
Görüntüleme ve floresan ölçümlerini tekrarlayın.
Hücre gövdesine TRPL translokasyonunu gösteren azaltılmış rabdomeral floresan sonrası gözlemlemek için görüntüleri karşılaştırın.
Öldürücü olmayan bir varyasyonda bir sinek hazırlamak için, buz anestezi uygulanmış sineği kafa üstü 200 mikrolitrelik bir pipet uc
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin