ELISA Kullanarak Nörodejeneratif Hastalıkla İlişkili Protein α-Sinükleinin Saptanması

Yüksek tuzlu bir tampona daldırılmış, nörodejeneratif hastalıkla ilişkili yanlış katlanmış bir nöronal protein olan mutasyona uğramış α-sinükleini aşırı eksprese eden transgenik bir fareden alınan beyin dokusu ile başlayın.

Dokuyu büyük bir havaneli ile homojenize edin, ardından dokuyu bozmak ve α-sinüklein de dahil olmak üzere hücre içi proteinleri serbest bırakmak için küçük bir havaneli uygulayın.

Homojenatı bir tüpe ve santrifüje aktarın. Protein içeren süpernatanı toplayın ve bir tamponla seyreltin.

Bu süpernatanı, spesifik olmayan bağlanmayı önlemek için bir bloke edici madde ile önceden işlenmiş α-sinükleine özgü antikorlarla kaplı bir mikroplakaya ekleyin.

Normal ve mutasyona uğramış α-sinükleinin bağlanmasına izin vererek çalkalama ile inkübe edin.

Plakayı yıkayın, ardından mutasyona uğramış α-sinükleine özgü tespit antikorları ekleyin ve çalkalama ile inkübe edin.

Tekrar yıkayın ve enzime bağlı antikorları ekleyin, ardından çalkalama altında inkübasyon yapın.

Alt tabaka ekleyin ve çalkalama altında karanlıkta inkübe edin. Substrat, bir renk değişikliği oluşturmak için enzim ile reaksiyona girer.

Reaksiyonu bir asitle durdurun ve mutasyona uğramış α-sinükleini ölçmek için absorban