JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:47 dk. • April 28th, 2025
Ölüm sonrası insan beyin dokusundan izole edilen nöromelanin granüllerinden (NMG'ler) türetilen peptitlerle başlayın.
Dopamin üreten nöronlarda bulunan NMG'ler, nöromelanin pigmenti, proteinler ve lipitler içerir.
Hidrofobik ligandlarla işlevselleştirilmiş silika bazlı sabit faz içeren yüksek performanslı bir sıvı kromatografisi (HPLC) sütunu alın.
Peptitleri sütuna yükleyin.
Hidrofobik peptitler, hidrofilik olanlardan daha güçlü bir şekilde kolona bağlanır.
Sütundan bir elüsyon tamponu geçirin.
Önce daha az hidrofobik peptit elüte olurken, daha sonra daha fazla hidrofobik peptit elüte olur.
Ayrıştırılan peptitler, kütle spektrometresinin elektrosprey iyonizasyon kaynağına girer ve burada yüklü peptit iyonlarına iyonize olurlar.
İyonize peptitler daha sonra kütle-yük oranlarına göre ayrıldıkları kütle analizörüne girerler.
Seçilen bir peptit iyonu çarpışma hücresine yönlendirilir ve kütle-yük oranları tekrar ölçülen daha küçük iyonlara parçalanır.
Son olarak, veriler NMG örneğinde bulunan proteinleri tanımlamak için bir referans veritabanıyla karşılaştırılır.
Metinde açıklandığı gibi triptik sindirim gerçekleştirdikten sonra, 200 ila 400 nanogram numune peptidini inert kütle spektrometrik ca
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin