JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:38 dk. • April 28th, 2025
İnce bağırsak nöroendokrin tümör sferoidlerini bir tüpte alın.
Hücreleri korumak için sabitleyici bir solüsyon ekleyin.
Fiksatifi yıkamak, santrifüjlemek ve tamponla değiştirmek için.
Kalan fiksatifleri çıkarmak için süpernatanı santrifüjleyin ve atın.
Hücresel zarlara nüfuz etmek ve spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için deterjan ve bloke edici bir madde içeren bir tampon ekleyin.
Fazla deterjanı ve bloke edici maddeyi çıkarmak için tamponla yıkayın.
Nöroendokrin hücreye özgü hedef proteine bağlanan primer antikorlarla inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın.
Primer antikorlara bağlanan florofor etiketli ikincil antikorlar ekleyin.
Fazla antikorları çıkarmak için tamponla durulayın.
Çekirdeği boyamak için bir boya içeren bir montaj ortamı ekleyin.
Sferoidleri bir kızağa aktarın ve bir kapak kızağı ile monte edin.
Spesifik proteinleri ifade eden sferoidin nöroendokrin hücrelerini görselleştirmek için bir Floresan mikroskobu kullanın.
500 mikrolitre paraformaldehit ekleyerek ve 15 dakika inkübe ederek organoidleri düzeltin. İnkübasyondan sonra, kültürü iki kez 1 mililitre PBS ile yıkayın. Kültüre nüfuz etmek için% 3 BSA ve% 0.1 Triton X-100 ile 500 mikro
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin