İnsan Sinaptozomları Kullanılarak Mikroglia Benzeri Hücrelerin Canlı Hücre Fagositoz Testi

Fagositik aktivite sergileyen mikroglia benzeri hücreler içeren çok kuyulu bir plaka alın.

Çekirdekleri etiketlemek için nükleer bir leke ile kuluçkaya yatırın.

Negatif kontrol kuyusuna bir aktin polimerizasyon inhibitörü ekleyin.

İnkübasyon sırasında, inhibitör aktin filamentlerine bağlanarak aktin polimerizasyonunu ve fagositozu inhibe eder.

Plakayı düşük sıcaklıklarda tutun ve pH'a duyarlı boya etiketli insan sinaptozomları ekleyin - nöral sinaptik terminallerin izole edilmiş parçaları.

Hücre-sinaptozom etkileşimlerini teşvik etmek, ancak erken alımı önlemek için plakayı düşük sıcaklıklarda santrifüjleyin.

Plakayı canlı hücre görüntüleme sistemine aktarın.

Test kuyusunda, sinaptozomlar fagositoza uğrar ve lizozomlarla birleşerek fagolizozomlar oluşturur. Lizozomal asidik ortam boyayı aktive ederek floresansına neden olur.

Zamanla, test kuyusunda, daha fazla sinaptozom yutulur ve floresanda daha fazla artışa neden olur.

Bununla birlikte, negatif kontrol kuyusunda, aktin polimerizasyonu inhibe edilir ve sinaptozom alımını önler. Elde edilen minimal floresan, aktin aracılı fagositoza floresan bağımlılığını doğrular.

Tahlil gününde, oyuk başına 40 mikrolitre besiyerini çıkarın ve 10 mikrolit