JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:06 dk. • April 28th, 2025
Bir farenin gözünden izole edilmiş, kimyasal olarak sabitlenmiş bir retina alın.
Göz, korneayı çevreleyen bir kan damarı ağı olan limbal vasküler pleksusa ısıya bağlı hasar gösterir.
Bu hasar sıvı drenajını bloke ederek göz içi basıncını (GİB) artırır ve retinal ganglion hücresi (RGC) dejenerasyonuna neden olur.
Hücre ve nükleer zarları geçirgen hale getirmek için retinayı bir geçirgenleştirme solüsyonu ile tedavi edin.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir engelleme solüsyonu uygulayın.
Engelleme çözümünü kaldırın.
Ağırlıklı olarak RGC'lerde eksprese edilen bir transkripsiyon faktörünü hedefleyen primer antikorları tanıtın.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın.
Primer antikorlara bağlanan florofor konjuge sekonje sekonder antikorları tanıtın.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın.
Çekirdekleri DNA bağlayıcı bir boya ile boyayın.
Retinayı yıkayın ve uygun bir montaj ortamı kullanarak bir cam slayt üzerine monte edin.
Retinayı epifloresan mikroskobu altında görselleştirin.
Hasarlı gözde kontrole kıyasla azalmış hücre yoğunluğu, artmış GİB'ye bağlı RGC dejenerasyonunu doğrular.
Retinaları izole ettikten sonra, iç retinayı yukarı bakacak şekilde 1 mililitre PBS iç
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin