Bir Fare Modelinde Hafif Travmatik Beyin Hasarının İndüksiyonu

Anestezi uygulanmış, hazırlanmış bir fareyi kafatası açıkta kalacak şekilde stereotaksik bir çerçeveye sabitleyin.

Kafatası referans noktalarını tanımlayın. Ardından, hayvanın başının altına bir baş destek aparatı yerleştirin ve kulak hasarını önlemek için şişirin.

Stereotaksik olarak yönlendirilen bir elektromanyetik çarpma tertibatını başın üzerine hizalayın.

Çarpma probunu hedef üzerinde tam olarak hizalamak için stereotaksik koordinatları sıfırlayın. Hayvanın kulağına bir temas sensörü takın.

Prob kafatasına dokunduğunda geri çekin. İstenilen darbe derinliğini ayarlayın ve uygun parametrelerle darbeyi başlatın.

Prob, kafatasına kontrollü bir kuvvet uygulayarak kortikal nöronlarda aksonal gerilme ve kesmeye neden olur, bu da hafif travmatik beyin hasarına yol açar.

Hayvanın doğrulma süresini, yaralanma sonrası normal vücut pozisyonunu geri kazanmak için geçen süreyi ölçün.

Fareyi görünür kafatası kırıkları açısından değerlendirin.

Ardından, fareyi çerçeveden çıkarın, kesiği kapatın ve antibiyotik uygulayın.

Farenin kurtarmasına izin ver.

Hafif, asetal reçine, konik uçlu kulak çubukları, ısırma çubuğu ve fare anestezi maskesi kullanarak fareyi stereotaksik çerçeveye sabitleyin. Ardından, anestezi derinliğini sağlamak için farenin solunumunu dikkatlice izleyin. Kornea kurumasını önlemek için gözlere steril göz kayganlaştırıcı uygulayın. Saç derisini povidon iyot çubuklarıyla sterilize edin.

Anestezi derinliğini sağladıktan sonra, kafatasını açığa çıkaracak şekilde bir neşter kullanarak gözler ve boyun arasında yaklaşık 1 santimetrelik bir orta hat kafa derisi kesisi yapın. Kafatasının 1 ila 2 dakika kurumasını bekleyin, ardından bregma ve lambdayı tanımlayın. Ardından, baş destek aparatını başın altına yerleştirin ve ampulü, farenin kafasının altına bastırana kadar suyla şişirin, ancak kafayı ısırma çubuğundan kaldırmayın.

Çarpma tertibatını farenin kafasının üzerine yerleştirin. Uzatma-geri çekme geçiş anahtarını uzatma konumuna getirerek çarpma tertibatını uzatın. Ardından, çarpma tertibatını bregma üzerinde ortalanana kadar hizalayın. Stereotaksik okuyucudaki dijital stereotaksik x ve y koordinatlarını 0'a sıfırlayın. Ardından, probu bregma'dan medial lateral ila 0 milimetre ve ön posterior ila eksi 1.6 milimetre olarak hedef koordinatlara hareket ettirerek probu çarpma konumu üzerinde hizalayın.

Fare kulağına temas sensörünü tıklayın. Yüzeyle ilk temas sağlanana kadar prob ucunu uzatılmış prob ile yavaşça indirin. Bip sesinde durun. Ardından, stereotaksik okuyucudaki dijital stereotaksik z koordinatlarını 0'a sıfırlayın.

Ucun kafatasıyla aynı hizada olup olmadığını dikkatlice kontrol edin. Ardından, kontrol kutusundaki geçiş anahtarını geri çekme konumuna getirerek çarpma tertibatını geri çekin. Uç geri çekilir ve çarpma anına kadar kafa ile daha fazla teması olmaz. Dorsal ventral derinliği eksi 1,2 milimetreye ayarlayarak darbe derinliğini ayarlayın. Anestezi derinliğini sağlamak ve gaz seviyesini gerektiği gibi ayarlamak için farenin solunumunu dikkatlice izleyin.

Darbeye doğru sağ geçiş anahtarına basarak darbeyi indükleyin. Prob ucu görüntülenen hızda aşağı iner, ayarlanan bekleme süresi boyunca aşağıda kalır ve geri çekilir. Düzeltme sürelerini kaydetmek için yakın kafa travması veya CHI darbesi verildikten hemen sonra zamanlayıcıyı başlatın. Ortalama doğrultma refleks süresi 5 ila 15 dakikadır.

Fareyi görünür kafatası kırıkları, kanamalar ve apne açısından değerlendirin. Fareyi stereotaksik çerçeveden çıkarın. Cildi birbirine zımbalayarak kafa derisini kapatın. Daha sonra kapalı kesiye steril pamuk uçlu aplikatör ile üçlü antibiyotik merhem sürün. Kurtarma için fareyi temiz bir tutma kafesine geri koyun.