Kronik Epilepsi ile İndüklenen Sıçanlarda Uyarıcı Nörotransmitter Düzeylerinin Değerlendirilmesi

Hipokampusa bir kılavuz kanül ve bir elektroensefalogram veya EEG elektrodu implante edilmiş bir kontrol faresi ve kronik epilepsi kaynaklı bir sıçan alın.

Epilepsi indüksiyonu, uyarıcı nörotransmitter salınımını artırarak postsinaptik hücrelere iyon akışına neden olur ve bu da sürekli uyarıcı potansiyeller oluşturur. Bu, elektrot kullanılarak kaydedilen, nöbet olarak adlandırılan senkronize elektriksel aktivite patlamalarına yol açar.

Kanüle yarı geçirgen bir zarı olan bir mikrodiyaliz probu yerleştirin.

Fareyi bir EEG kayıt sisteminin kafesine bağlayın.

Prob girişi yoluyla beyin dokusuna fizyolojik bir tampon aşılayın.

Nöbet olmadığından emin olun ve nörotransmitter seviyelerini değerlendirmek için prob çıkışı yoluyla hücre dışı sıvı toplayın.

Epileptik sıçanlarda yüksek bazal seviye, epilepsi aracılı bir artışı gösterir.

Yüksek potasyum tamponu infüze edin ve örnekleri yeniden toplayın.

Artan potasyum, sürekli nörotransmitter salınımını tetikleyerek nöronal uyarılabilirliği uzatır.

Hem epileptik hem de kontrol sıçanlarında nörotransmitter seviyelerinde geçici bir artış, potasyumun neden olduğu yüksek bir artışı gösterir.

Mikrodiyaliz problarını üreticinin kullanım kılavuzuna göre ilk kullanım için hazırlayarak başlayın ve bunları zil solüsyonu ile doldurun. Ardından, 10 santimetre uzunluğundaki FEP boru parçalarını kesin ve farklı renkteki boru adaptörlerini kullanarak bunları probun giriş ve çıkış kanüllerine bağlayın. Borunun tüm bağlantılarda ölü boşluk kalmayacak şekilde adaptörlere temas ettiğinden emin olun.

Hayvanın kafasını sıkıca tutarak cımbız kullanarak sahte kanülü kılavuzundan çıkarın. Mikrodiyaliz probunu kılavuz kanüle yerleştirin ve kanülü daha da sıkılaştırmak için modelleme kili kullanın. Ardından, hayvanı bağlı EEG kayıt sistemine bağlayın. Sonra hayvanı pleksiglas silindirin içine koyun ve yeni ortamı keşfetmesine izin verin. Uyanık ve serbestçe hareket eden sıçan hareketlerini takip edin.

Ardından, probun girişini, boru adaptörlerini kullanarak zil çözeltisi içeren körelmiş 22 gauge bir iğne ile 2,5 mililitrelik şırıngaya bağlayın. 2,5 mililitre şırınganın pistonunu sürekli iterek bir mililitre zil çözeltisini 10 saniye içinde probun içine itin. Probun kullanıma hazır olduğunu belirtmek için çıkışta görünen sıvının damlasını kontrol edin. Son olarak, FEP tüpüne bağlı 2,5 mililitrelik şırıngaları zil solüsyonu içeren boru adaptörleri ile doldurun ve infüzyon pompasına monte edin. Pompayı dakikada iki mikrolitre ile çalıştırın ve gece boyunca çalışmasına izin verin.

Video EEG kayıtları ile doğrulandıktan sonra, numune alımından önceki üç saat içinde nöbet olmadığını doğruladıktan sonra, zil çözeltisi ile doldurulmuş FEP tüp kanüllü şırıngaları taşıyan pompayı durdurun. 100 milimolar potasyum çözeltisi içeren modifiye edilmiş bir zil çözeltisi ile doldurulmuş boru adaptörleri ile FEP tüpüne bağlı başka bir 2,5 mililitre şırınga seti monte edin. Pompayı dakikada 2 mikrolitre ile çalıştırın ve çalışmasına izin verin. Sistemde hava kabarcığı olup olmadığını kontrol edin ve borunun tüm bağlantılarda ölü boşluk kalmayacak şekilde adaptörlere temas ettiğinden emin olun.

Ardından, probun kullanıma hazır olduğunu belirtmek için çıkışta görünen sıvının damlasını kontrol edin. Daha sonra, zil çözeltisi ile doldurulmuş şırıngaların FEP borusunu her bir hayvandaki probun giriş kanülüne bağlayın ve çıkışın ucundaki sıvı damlasının görünmesini bekleyin. Probun çıkışını FEP tüpüne bağlayın, bu da test tüpünde toplanmaya yol açar.

FEP tüpünü delikli bir kapakla kapalı 0.2 mililitrelik test tüpüne yerleştirin. Ve bir parça modelleme kili ile sabitleyerek tüpün yerinde kaldığından emin olun. Pompayı dengelemek için numune toplamadan 60 dakika boyunca dakikada 2 mikrolitrede çalıştırdıktan sonra, sistem, temel koşullar altında art arda 30 dakikalık beş diyalizat numunesi toplar. Ve numuneleri buz üzerinde saklayın.

10 dakika sonra, boruyu 100 milimolar potasyum zil çözeltisi içeren şırıngalardan normal zil çözeltisine geçirin ve pompanın çalışmasına izin verin. Beşinci dengeleme sonrası diyalizatın toplanmasından sonra, bir saat boyunca her 10 dakikada bir 20 mikrolitre diyalizat fraksiyonu toplayın. Ardından üç adet 30 dakikalık ek diyalizat örneği toplayın ve pompayı durdurun. Son olarak, deneyden sonra numuneleri eksi 80 santigrat derecede HPLC analizine kadar saklayın.