Fare Beyin Dokusunun Donarak Kırılmış Bir Örneğinde Nöronal Membran Proteinlerinin İmmünoetiketlenmesi

Bir tamponda fare beyin dokusunun donmuş kırık bir örneğini alın.

Numune, yüzey detaylarını geliştirmek için platinle ve yapısal stabilite için karbonla kaplanmıştır.

Numuneyi, deterjan içeren bir sindirim tamponu olan bir şişeye aktarın.

Doku parçalanmasını kolaylaştırmak için inkübe edin, zarı ve kaplamaya gömülü proteinleri sağlam bırakın.

Kalıntıları temizlemek için tamponla yıkayın.

Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir engelleme solüsyonu ekleyin.

Hedef nöronal membran proteinine özgü primer antikorları tanıtın.

Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın.

Primer antikorlara bağlanan altın konjuge sekonder antikorlarla inkübe edin.

Fazla antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın.

Mikroskopi sırasında tuz kalıntılarından kaynaklanan artefaktları önlemek için suyla durulayın.

Numuneyi bir transmisyon elektron mikroskobu veya TEM ızgarası üzerine monte edin.

TEM altında, siyah noktalar olarak görünen altın parçacıklarıyla tanımlanan hedef nöronal membran proteinini görselleştirin.

SDS sindirimi için, bir kopyayı 1 mililitre SDS-sindirim tamponu ile doldurulmuş 4 mililitrelik bir cam şişeye aktarın. Çalkalayarak 80 derecede 18 saat sindirilmesine izin verin. İm