JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 7:03 dk. • April 28th, 2025
Deterjan, kalsiyum ve proteaz inhibitörleri içeren bir tampondaki nörosfer hücrelerini alın.
Deterjan hücreleri geçirgenleştirirken, inhibitör kromatine bağlı hedef proteini korumak için proteazları inaktive eder.
Nükleaz ekleyin ve inkübe edin. Nükleaz, kromatini sindirmek için kalsiyum kullanır.
Kalsiyumu şelatlayan ve nükleazı etkisiz hale getiren EDTA içeren bir tampon ekleyin.
Hücreleri parçalamak için lizis tamponu ekleyin ve kromatini serbest bırakın.
Süpernatanı santrifüjleyin ve toplayın.
Hedef proteine özgü antikorları ekleyin ve rotasyonla inkübe edin. Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın.
Antikoru hedefleyen manyetik boncukları tanıtın ve rotasyonla inkübe edin.
Spesifik olarak bağlanmamış DNA'yı ayırmak için lizis tamponu ekleyin.
Boncukları manyetik olarak yakalayın ve süpernatanı çıkarın.
Spesifik olarak bağlanmamış proteinleri ayırmak için yüksek tuzlu bir tampon ekleyin.
Boncukları manyetik olarak yakalayın ve süpernatanı çıkarın.
Bir stabilizasyon tamponu ekleyin, boncukları manyetik olarak yakalayın ve kirleticileri çıkarın.
Proteinleri sindirmek için bir proteinaz-K tamponunda yeniden süspanse edin ve DNA'yı serbest bırakın.
Nörosferler toplandıktan sonra, 5 dakika boyunca
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin