Jel Gömülü Hasta Kaynaklı Hastalıklı Fibrovasküler Dokunun İmmünofloresan Boyanması

Rehidre edilmiş fibrin jeli gömülü, sabit ve geçirgen hasta kaynaklı hastalıklı fibrovasküler dokuyu alın. Bu doku, endotel hücreleri ve perisitleri olan düzensiz neovasküler yapılar içerir.

Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için dokuyu bloke edici bir çözelti ile tedavi edin.

Endotel hücreleri ve perisitler üzerindeki yüzey proteinlerini hedef alan birincil antikorlarla inkübe edin.

Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tampon ile durulayın, ardından tamponda inkübe edin.

Tampon yıkamanın ardından, birincil antikorlara bağlanmak için floresan boya ile konjuge ikincil antikorlarla inkübe edin.

Fazla antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın ve tamponda inkübe edin.

Tampon yıkamanın ardından, hücre çekirdeklerini boyamak için bir nükleer boya ekleyin. Bağlanmamış boyayı çıkarmak için tampon ve deiyonize su ile durulayın.

Dokuyu bir mikroskop lamı üzerine aktarın.

Montaj ortamını uygulayın ve hızlı sertleşen montaj ortamı içeren bir lamel ile kapatın.

Havayla kuruduktan sonra slaytı düşük bir sıcaklıkta saklayın. Ardından, neovasküler yapılar içindeki endotel hücrelerinin ve perisitlerin uzamsal düzenlemesini görselleştirmek için dokuyu bir epifloresan mikroskobu altında görüntül