Floresan In Situ Hibridizasyonun Ardından Fare Beyin Dilimlerinde Nöronların İmmün Boyanması

Kolin asetiltransferaz eksprese eden kolinerjik nöronlar da dahil olmak üzere nöronlar içeren sabit ve geçirgen fare beyin dilimlerini alın.

Dilimler, kolinerjik aksonlara lokalize hedef mRNA'ları tespit etmek için floresan in situ hibridizasyona tabi tutulur ve floresan mikroskobu ile tespit edilen floresan problar kullanılarak güçlendirilmiş sinyaller elde edilir.

Proteinler ve bir söndürme maddesi içeren bir bloke edici çözelti ekleyin. Proteinler spesifik olmayan bağlanmayı önler ve söndürme maddesi artık fiksatifleri nötralize eder.

Nöronal kolin asetiltransferazı hedef alan primer antikorlarla inkübe edin.

Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın.

Kolin asetiltransferaza bağlı primer antikorlara bağlanan florofor konjuge sekonjede sekonder antikorlarla inkübe edin.

Fazla antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın, ardından tampon kalıntılarını gidermek için damıtılmış suda durulayın.

Çekirdekleri etiketlemek için dilimleri nükleer leke içeren montaj ortamıyla birleştirin.

Floresan mikroskobu kullanarak, spesifik antikorlarla boyanmış hedef mRNA sinyallerini ve kolinerjik aksonları görselleştirmek için dilimleri görüntüleyin.

Her dilimi, mililitre BSA, 100 milimolar glis