JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:11 dk. • April 28th, 2025
Elektron mikroskobu ızgarasında bir fare retina kesiti alın. Bölüm, bipolar hücrelere sinaptik olarak bağlı retinal ganglion hücrelerini veya RGC'leri içerir.
Presinaptik bipolar hücreler, sinaptik zarın yakınında bir şerit yapısında düzenlenmiş nörotransmitter vezikülleri içerir.
Postsinaptik RGC'ler, zarlarında kümelenmiş nörotransmitter reseptörleri gösterir. Bu hücreler kolera toksini alt birimi B veya CTB ile etiketlenir.
PH'ı korumak için bir tamponla yıkayın.
Spesifik olmayan bağlanma bölgelerini maskelemek için bir engelleme tamponu ile inkübe edin.
Nörotransmitter reseptörlerini ve CTB'yi hedef alan primer antikorlarla inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak ve pH'ı korumak için bir tamponla yıkayın.
Birincil antikorlara bağlanan ve hedef molekülleri etiketleyen farklı boyutlardaki altın nanopartiküllere konjuge edilmiş ikincil antikorlarla inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarın, ardından numuneyi havayla kurutun.
Makromolekülleri bağlayan ve kontrastı artıran ağır metaller uygulayın.
Elektron mikroskobu kullanarak, etiketli CTB'leri kullanarak RGC'leri tanımlayın ve etiketli nörotransmitter reseptörlerini bulun.
Bu adımda, 70 nanometre kalınlığında, ultra ince kesit
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin