JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:52 dk. • April 28th, 2025
Lüminesan bir substrat olan lusiferin ile desteklenmiş bir stimülasyon çözeltisinde yapışık rekombinant memeli hücreleri içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
Luciferin'in hücreye girmesine izin vermek için kuluçkaya yatırın.
Bu hücreler, koku alma G-proteinleri ve reseptör taşıma proteinleri ile birleştirilmiş zara bağlı koku reseptörlerini eksprese eder.
Ek olarak, hücreler sitoplazmik Glosensor proteinlerini, döngüsel AMP'ye duyarlı ışıldayan proteinleri eksprese eder.
Kuyucuklar arasındaki boşluğa buharlaşabilir bir koku çözeltisi ekleyin ve plakayı aynı koku verici madde ile önceden dengelenmiş bir luminometre aletinin içine yerleştirin.
Lüminesans ölçümünü başlat.
Koku molekülleri, hücrelerin koku reseptörlerine bağlanır, birleştirilmiş G-proteinini aktive eder ve G-proteininin α alt birimini veya Gα'yı ayrıştırır.
Ayrışmış Gα alt birimi, zara gömülü adenilat siklaz enzimine bağlanarak onu aktive eder. Aktive edilmiş enzim, ATP'leri döngüsel AMP'lere dönüştürür.
Bu döngüsel AMP'ler, glosensör proteinlerine bağlanarak konformasyonlarını değiştirir ve lusiferin bağlanmasını sağlar.
Bu etkileşim, koku reseptörlerinin aktivasyonunu doğrulayarak lüminesans üretir.
75 mikrolitre cAM
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin