Dorsal Kök Ganglion Enjeksiyonu ve Dorsal Kök Ezilme Yaralanması Kullanılarak Bir Sıçanda Duyusal Akson Rejenerasyonunun Modellenmesi

Anestezi uygulanmış bir sıçan ile başlayın.

Servikal C2 ve torasik T2 omurları arasında orta hat cilt kesisi yapın.

Daha sonra, beyaz fibröz doku orta hattı boyunca kesin ve ilk kas tabakasını geri çekin.

İkinci kas tabakasının orta hattındaki ince membranöz dokuyu inceleyin, ardından çizgili uzunlamasına kasları geri çekin.

Son olarak, vertebral kolonu ortaya çıkarmak için üçüncü kas tabakasını kesin.

C5 ila C8 dorsal kök gangliyonlarını veya DRG'leri ortaya çıkarmak için sol C4 ila T1 omurlarının üzerindeki lamina ve pedikülü çıkarın.

DRG'lere rekombinant adeno ile ilişkili bir viral süspansiyon enjekte edin.

Virüs, aksonal rejenerasyona yardımcı olan büyümeyi teşvik eden bir proteini kodlar.

Forseps kullanarak, DRG'den omuriliğe aksonal bağlantıları kesmek için C5 ila C8 dorsal köklerini ezin ve kontrollü bir aksonal yaralanma oluşturun.

Model, virüs aracılı aksonal rejenerasyonu incelemeye hazır.

Ameliyata, cilt üzerinde belirgin C2 ve T2 spinöz süreçlerini bularak başlayın. Daha sonra 10 numara neşter kullanın, C2 ve T2 spinöz süreçleri arasında bir cilt kesisi yapmak için. Cilt açıldıktan sonra, jöle benzeri bir dokuya sahip olan kasın ilk tabakasında beyaz fibröz bir doku orta hattı görünmelidir.

Beyaz orta hat boyunca ilk kas tabakası üzerinde benzer büyüklükte bir kesi yapın. Belirgin T2 spinöz sürecinin ötesine geçmeyin, çünkü orada bulunan büyük bir kan damarı vardır. Biri rostral ve diğeri kaudal olarak yerleştirilmiş iki ekartör kullanarak ilk kas tabakasını geri çekin.

Çizgili bir görünüme sahip ikinci kas tabakası artık görünür olmalıdır. İnce bir zar dokusu ile birbirine bağlanan iki uzunlamasına kasın görülebildiği ikinci kas tabakasının orta hattını bulun. Daha sonra membranöz dokuyu incelemek ve iki uzunlamasına kası ayırmak için bir çift mikro makas kullanın.

Ekartörleri, omurgayı kaplayan üçüncü ince namlu tabakasını ortaya çıkaracak şekilde ayarlayın. Dikenli süreçler, üçüncü kas tabakası üzerine bir çift forseps ile hafifçe dokunularak hissedilebilir. Üçüncü kas tabakasında küçük bir kesi yapmak için mikro makas kullanın. Ve omurları net bir şekilde ortaya çıkarmak için bir küret veya neşter kullanarak kemikten yana doğru nazikçe kazıyın.

Sol C5 ila C8 DRG'leri açığa çıkarmak için, lamina ve pedikülün bir kısmını dikkatlice çıkararak C4 ila T1 omurları üzerinde sol hemilaminektomi yapmak için bir çift ince rongeur kullanın. Enjeksiyon için yeterli miktarda DRG'ye maruz kaldıktan sonra, özel yapım 33 gauge künt iğne ile donatılmış virüs dolu mikrolitre şırıngayı stereotaksik şırınga tutucusuna yerleştirerek şırıngayı hazırlayın. Ardından, enjeksiyon iğnesinin yerleştirilmesine yardımcı olmak için hedeflenen DRG'nin her birinde küçük bir yüzeysel açıklık yapmak için 30 gauge eğimli bir iğne kullanın. 33 gauge iğneyi DRG'nin merkezine yerleştirmek için stereotaksik koordinatları yavaşça ayarlayın.

İdeal olarak, enjekte edilen çözeltinin DRG boyunca homojen bir şekilde yayılmasını sağlamak için iğne DRG'nin tam ortasına yerleştirilmelidir.

İğne yerleştirildikten sonra, her DRG'ye 1 mikrolitre virüs enjekte etmek için infüzyon şırınga pompasını kullanın. Enjeksiyon sırasında, virüs çözeltisi renkli bir boya içeriyorsa, DRG yavaşça renk değiştirecektir. İğneyi fazla batırmayın, çünkü bu, DRG'nin ventral tarafından sıvının dışarı sızmasına neden olabilir.

Enjeksiyon sırasında sızıntı meydana gelirse, iğnenin konumunu hemen ayarlayın. Enjeksiyonun bitiminden üç dakika sonra enjeksiyon iğnesini geri çekin. Eşzamanlı bir C5 ila C8 dorsal kök ezilme yaralanması gerçekleştirmek için, bir çift ince uçlu forseps kullanarak her bir kökü 10 saniye boyunca üç kez ezin. Forsepslerin uçlarına tamamen karşı çıkın. Ezilme bölgesinde dokuda beyaz bir çizgi görünmelidir.