JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:15 dk. • April 28th, 2025
Kan-beyin bariyerinin endotel hücre tabakasını taklit eden, sıçan beyni mikrovasküler endotel hücrelerinin veya RBMEC'lerin tek katmanlı kültürünü içeren odacıklı bir slayt alın.
Hücreler, oksijen-glikoz yoksunluğundan ve ardından reoksijenasyondan kaynaklanan stres nedeniyle bozulmuş sıkı bağlantı proteinleri ve aktin stres lifleri sergiler.
Ortamı çıkarın ve hücreleri yıkayın, hücre mimarisini korumak için bir fiksatif uygulayın, ardından fazla fiksatifi yıkayın.
Hücresel zarları geçirgen hale getirmek için bir deterjanla tedavi edin.
Spesifik olmayan bağlanma bölgelerini maskelemek için bir engelleme maddesiyle inkübe edin.
Sıkı bağlantı proteinlerini etiketlemek için, spesifik birincil antikorlarla inkübe edin, ardından bağlanmamış antikorları çıkarın.
Primer antikorları etiketlemek için florofor konjuge ikincil antikorlarla inkübe edin.
Alternatif olarak, stres liflerini etiketlemek için florofor etiketli falloidin ekleyin.
Bağlanmamış etiketleme moleküllerini çıkarmak için yıkayın.
Hazneyi çıkarın, çekirdekleri boyamak için floresan DNA bağlayıcı boya içeren bir montaj ortamı uygulayın, ardından bir lamel ile kapatın.
Konfokal mikroskopi kullanarak, floresanla etiketlenmiş sıkı bağla
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin