JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:08 dk • April 28th, 2025
Pigmentlerin ve lipitlerin varlığı nedeniyle saydam olmayan bir beyin dokusu örneğiyle başlayın. Bu bileşenler, floresan etiketli nöronlarda ışık saçılmasına neden olur.
Dokuyu artan metanol konsantrasyonlarına sahip solüsyonlarda sırayla inkübe ederek ondan suyu çıkarın ve dokuyu kademeli olarak kurutun.
Ardından, kalan suyu ortadan kaldırmak için bu dokuyu konsantre metanol ile tedavi edin ve tam dehidrasyonu sağlayın.
Ardından, dokuyu diklorometan ve metanol içeren bir ilk temizleme çözücüsüne aktarın.
Çözücünün dokuya derinlemesine nüfuz etmesini sağlamak için hafifçe çalkalayarak inkübe edin.
Diklorometan, dokudaki pigmentleri ve lipitleri uzaklaştırarak ışık saçılımını azaltır ve saydamlığı artırır.
Son olarak, dokuyu hidrofobik bir çözücü olan dibenzil etere aktarın ve çalkalamadan inkübe edin.
Çözücü, doku şeffaflığını daha da artıran son temizleme maddesi olarak işlev görür.
Bu işlem, etiketli nöronların ve beyin dokusundaki bağlantılarının daha net görselleştirilmesini sağlayarak ışık penetrasyonunu iyileştirir örnek.
Numuneyi oda sıcaklığında her biri bir saat boyunca %20, %40, %60, %80 ve %100 metanol içinde seri olarak inkübe edin. Ardından, gece boyunca taze %100 metanol içinde inkübe edin. Ertesi gün, numuneyi taze hazırlanmış% 66 DCM'de% 33 metanol içinde% 3 boyunca oda sıcaklığında çalkalayarak üç saat inkübe edin. Üç saat sonra, numuneyi berrak olana kadar çalkalamadan dibenzil eter içinde inkübe edin. Ardından, görüntülemeye kadar dibenzil eter içinde saklayın.