Perkütan Epididimal Spermatozoa Aspirasyonu ve İşlenmesi için Bir Teknik

Menide erkek gamet veya spermatozoa bulunmadığı bir durum olan azospermi olan bir erkek hastayla başlayın.

Genital bölge dezenfekte edilir ve sadece spermatozoa üreten testisleri barındıran organ olan skrotumu ortaya çıkarmak için bir örtü ile örtülür.

Bölgeyi aydınlatın ve spermatozoanın olgunlaşmasından ve depolanmasından sorumlu bir yapı olan epididimiyi tanımlayın.

Epididimal dokuya gametler için özel bir kültür çözeltisi içeren bir şırınga yerleştirin.

Spermatozoa içeren epididimal sıvıyı çıkarmak için dokuyu delerken negatif basınç uygulayın.

Spermatozoa canlılığını korumak için toplanan sıvıyı kültür solüsyonunu içeren bir kaba aktarın.

Bir mikroskop kullanarak, hareketlilik gösteren olgun, sağlıklı spermatozoaları sayın.

Çözeltiyi bir tüpe aktarın, ardından spermatozoayı ayırmak ve süpernatanı çıkarmak için santrifüjleyin.

Hücreleri taze bir kültür çözeltisi içinde yeniden süspanse edin.

İzole edilen spermatozoalar artık kısırlık tedavi prosedürlerinde kullanıma hazırdır.

Başlamak için bir cerrahi alet paketi, iki şırınga, dezenfektan solüsyonu, steril lastik eldivenler ve yapışkan pansuman toplayın. Yüksek basınçlı buhar sterilizasyonuna tabi tutulan cerrahi alet paketinde hasar olup olmadığını inceleyin. Paketi alet masasına yerleştirin ve dış katmanı açın. Ardından, androloglardan steril lastik eldiven giymelerini isteyin.

Cerrahi alet paketinin iç katmanını açın ve uygun sterilizasyon için sterilizasyon gösterge bandını kontrol edin. Ardından, anestezi ve ameliyat için 0,7 mililitrelik iğnelerle donatılmış iki adet 5 mililitrelik şırınga hazırlayın. Lidokain enjeksiyonu içeren ampullayı açın. Lidokain çözeltisini aspire etmek ve şırıngadaki hava kabarcıklarını gidermek için 5 mililitrelik steril bir şırınga kullanın.

Şimdi, hazırlanan hastayı litotomi pozisyonunda ameliyat masasına yerleştirin. Pantolonu çıkardıktan sonra, perine ve göbeğin altındaki alt karın bölgesini tamamen ortaya çıkarmak için üst giysiyi göbeğin üzerine sabitleyin. Ardından, hastanın testis torbasını aydınlatmak için gölgesiz lambanın açısını ayarlayın.

Steril bir gazlı bez topunu kavramak için oval forseps kullanın. Gazlı bez topunu tamamen dezenfektan bir solüsyona daldırın. Ve alt karın bölgesinden başlayarak ön ve iç uyluklara, perineal bölgeye, penise ve skrotuma doğru ilerleyerek cildi dezenfekte edin. Ardından, hastanın kalçasının altına steril bir kare havlu yerleştirin. Cerrahi alanın etrafına steril bir tutma havlusu yayın ve tüm bölgedeki skrotum tamamen açığa çıkarın.

Steril bir Pasteur pipeti kullanarak, yaklaşık 2 mililitre G-MPOS-PLUS kültür solüsyonunu kültür kabına aktarın. Kapağı kapattıktan sonra, tabağı transfer penceresinden ameliyathanedeki hemşireye teslim edin. Şimdi kültür kabını alet masasının üzerindeki steril havlunun üzerine yerleştirin ve kapağı açın.

Başka bir 5 mililitre şırınga kullanarak, yaklaşık 0.2 mililitre G-MPOS-PLUS kültür solüsyonunu aspire edin ve hava kabarcıklarını çıkarın. Ardından, hastanın skrotumunu sol elinizle tutun ve delinme gerektiren epididimi sabitleyin. Cerrahi ponksiyon yerini doğrulamak için epididimiyi sağ elinizle palpe edin.

Daha sonra, sağ elinde G-MPOS-PLUS kültür solüsyonu içeren 5 mililitrelik bir şırınga ile cilde dik olarak epididimal dokuya delin. Negatif basıncı korurken, sıvının iğneden girmesine izin vermek için epididimal dokuyu tekrar tekrar delin, ardından delme iğnesini geri çekin.

Ekstrakte edilen epididimal sıvıyı kültür kabına enjekte edin. Bundan sonra, toplanan epididimal sıvı miktarını en üst düzeye çıkarmak için şırıngayı durulamak için yakındaki G-MPOS-PLUS kültür solüsyonunu aspire edin. Şimdi, G-MPOS-PLUS kültür sıvısı ve epididimal sıvı içeren kültür kabını, transfer penceresinden embriyo laboratuvar teknisyenine aktarın.

Kültür kabını ters çevrilmiş bir optik mikroskop tablasına yerleştirin ve sabitleyin. Mikroskobun güç anahtarını açın ve ışık yoğunluğunu uygun şekilde ayarlayın. Ardından, ters çevrilmiş optik mikroskobun dönüştürücüsünü döndürün. 10 kez objektif lensi seçin ve odak uzaklığını ayarlamak için kaba ve ince odak spirallerini döndürün.

Epididimal spermatozoa bulunduktan sonra, sayı ve kaliteyi değerlendirmek için bunları 40 kat büyütmede gözlemleyin. Steril bir Pasteur pipeti kullanarak, yeterli aktif spermatozoa gözlemledikten sonra sıvıyı kültür kabından 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın. Santrifüj tüpünü denge tepsisine yerleştirin ve düzleştirmek için steril su içeren aynı özelliklere sahip bir santrifüj tüpü kullanın.

Ardından santrifüj kapağını açın. Tüpleri simetrik olarak kart yuvasına yerleştirin ve kapıyı kapatın. Santrifüjleme işlemini başlatmak için Başlat düğmesine basın. İşlem tamamlandıktan sonra, epididimal sıvıyı içeren tüpü santrifüjden çıkarın. Ardından, süpernatanı steril bir Pasteur pipeti ile nazikçe aspire edin ve çizilen süpernatanı atın.

Steril bir Pasteur pipeti kullanarak, tortuyu santrifüj tüpünün altından yaklaşık 2 mililitre G-IVF Plus kültür çözeltisi içeren yeni bir santrifüj tüpüne aktarın. Tortuyu iyice yeniden süspanse etmek için çözeltiyi nazikçe pipetleyin. Yaklaşık 0,5 mililitre G-IVF Plus kültür solüsyonunu santrifüj tüpüne aktarın. İyice askıya almak için alttaki epididimal spermatozoayı hafifçe üfleyin ve bunları ICSI prosedürü için kullanın.