Testis Kapsül içinde teratom Üretimi

Bu prosedürün genel amacı, insan pluripotent kök hücreleri veya H PSC'ler kullanarak, immün yetmezliği olan farelerin testis kapsülünde teratomlar oluşturarak pluripotensiyi analiz etmektir. İşleme, pluripotens açısından test edilecek olan muhtemel H PSC kültürünün hasat edilmesiyle başlayın. Ardından, fare testislerini açığa çıkarmak için cerrahi işlem gerçekleştirin ve hücreleri testis kapsülüne enjekte edin.

Testisleri orijinal konumlarına geri yerleştirin ve cerrahi olarak fareyi tekrar kapatın; altı ila 12 hafta sonra, oluşan tümörü her bir germ tabakasından hücrelerin varlığı açısından histoloji ile inceleyin. Nihayetinde, sonuçlar, bir HPSC hattının immün yetmezliği olan bir farede üç germ tabakasının tamamından hücrelere farklılaşabildiğini göstererek gerçekten pluripotent olduğunu kanıtlayabilir. İnsan kök hücrelerinin pluripotensini kanıtlamak için son zamanlarda yeni yöntemler bildirilmiş olsa da, teratoma deneyi, prosedürün laboratuvarımdaki kıdemli teknisyen Tron tarafından gerçekleştirileceği gibi, alanındaki altın standart olmaya devam etmektedir.

İnsan pluripotent kök hücrelerini konfluense kadar büyütün ve ardından hPSC'leri Accutane ile disose edin; her enjeksiyon için 1 milyon hPSC yeniden süspande etmek üzere hücreleri sayın. İlk olarak, immün yetmezlik gösteren bir fare suşundan, altı haftalık anestezi altındaki erkek farelerin abdomenini tıraş makinesi ile tıraşlayın. Fare abdomeninin ön duvarını, abdomenin merkezinden başlayarak saat yönünde dışa doğru povidon iyot çözeltisi ile temizleyin.

Ardından tıraş edilen bölgeyi %70 ethanol ile yıkayın. Her seferinde pamukları değiştirerek işlemi üç kez tekrarlayın. Cerrahi işlemi gerçekleştirmek için hayvanı, steril cerrahi makasların bulunduğu steril bir havuz içindeki ısıtma pedine taşıyın.

Peritonu pensle tutarken, kalça ekleminin hemen altı seviyesinden deri ve periton boyunca bir santimetrelik boyuna bir insizyon yapın. Bir başka steril pensle sağ kalça yönünde aşağıya doğru ilerleyin ve beyaz yağlı dokuyu bağlı olan testislerle birlikte dışarı çekin. Şimdi, enjekte edilecek hpsc ile bir CC'lik tüberkülin şırıngasını doldurun. Herhangi bir ana kan damarından uzak olacak şekilde, testis kapsülünün merkezine yavaşça 20 ila 30 mikrolitre H PSC enjekte edin.

Hücrelerin geri akışını önlemek için iğneyi forseps yardımıyla yavaşça çıkarın. Testisleri ve yağ dokusunu karın bölgesindeki orijinal konumlarına geri yerleştirin. Peritonu iki veya üç emilebilir sütür ile kapatın ve cildi oto kliplerle kapatın.

Ameliyat sonrası, gerektiğinde günde iki kez analjezik uygulayın. Altı ila 12 haftalık süreç boyunca hayvanı palpabl tümör büyümesi açısından izleyin. Tümör boyutu yaklaşık beş milimetreye ulaştığında, belgeleme amacıyla sakrifiye edilen fareden tümörü çıkarın.

Tümörün fotoğrafını çekin, hem boyutunu hem de ağırlığını ölçün. Ardından tümörü küçük parçalara ayırın ve histopatoloji için %4 paraaldehit çözeltisinde sabitleyin. Genellikle, altı ila 12 hafta sonra bir teratom gözlemlenir.

Bu örnekte, 1 milyon insan WA 09 pluripotent kök hücresi, immün yetmezliği olan bir farenin testis kapsülüne enjekte edilmiştir. Teratomanın yakından incelenmesi, heterojeniteyi ve çok sayıda yapışık kisti ortaya koymaktadır. Beklendiği gibidir.

Histopatolojik analizler, üç germ katmanının her birinden hücrelerin mevcut olduğunu göstermektedir. Bu prosedürü uygularken, analizinin doğru yapıldığından emin olmak için oldukça potans olduğunu bildiğiniz pozitif kontrol bir hücre hattı eklemeyi hatırlamanız önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, bir insan kök hücre hattının pluripotent olup olmadığını nasıl belirleyeceğiniz konusunda iyi bir fikre sahip olmalısınız.