Name: Koku Duyu Nöronlar Cilia Kafesli Bileşiklerin Flash Fotoliz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 35 s
Description: Öğrenin fare koku duyu nöronlarında kafesli bileşiklerin flaş fotolizi yöntemiyle siklik nükleotid kapılı kanalları nasıl aktive edeceğinizi. Patch-clamp kayıtları ile sinir sinyal iletimini inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Ellis-Davies, G. C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caged+compounds%3A+photorelease+technology+for+control+of+cellular+chemistry+and+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Caged compounds: photorelease technology for control of cellular chemistry and physiology.</a> Nat. Methods. 4, 619-628 (2007).</li>
<li>Pifferi, S., Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+nucleotide-gated+ion+channels+in+sensory+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Cyclic nucleotide-gated ion channels in sensory transduction.</a> FEBS Lett. 580, 2853-2859 (2006).</li>
<li>Bozza, T. C., Kauer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant+response+properties+of+convergent+olfactory+receptor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Odorant response properties of convergent olfactory receptor neurons.</a> J. Neurosci. 18, 4560-4569 (1998).</li>
<li>Hagen, V., Bendig, J., Frings, S., Eckardt, T., Helm, S., Reuter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Efficient+and+Ultrafast+Phototriggers+for+cAMP+and+cGMP+by+Using+Long-Wavelength+UV%2FVis-Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Highly Efficient and Ultrafast Phototriggers for cAMP and cGMP by Using Long-Wavelength UV/Vis-Activation.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 40, 1045-1048 (2001).</li>
<li>Kaplan, J. H., Ellis-Davies, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photolabile+chelators+for+the+rapid+photorelease+of+divalent+cations%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Photolabile chelators for the rapid photorelease of divalent cations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 6571-6575 (1988).</li>
<li>Rapp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+lamp-based+irradiation+of+caged+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Flash lamp-based irradiation of caged compounds.</a> Methods. Enzymol. 291, 202-222 (1998).</li>
<li>Gurney, A. M. Flash photolysis of caged compounds. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGurney%2C+AM+%22Microelectrodes%3A+Theory+and+Applications%22">Microelectrodes: Theory and Applications</a>. Montenegro, I., Queiros, M. A., Daschbach, J. L. , Proc. NATO Adv. Study Inst. Portugal. (1991).</li>
<li>Lagostena, L., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-cell+recordings+and+photolysis+of+caged+compounds+in+olfactory+sensory+neurons+isolated+from+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">Whole-cell recordings and photolysis of caged compounds in olfactory sensory neurons isolated from the mouse.</a> Chem. Senses. 28, 705-716 (2003).</li>
<li>Boccaccio, A., Lagostena, L., Hagen, V., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+adaptation+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+does+not+require+the+activity+of+phosphodiesterase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Fast adaptation in mouse olfactory sensory neurons does not require the activity of phosphodiesterase.</a> J. Gen. Physiol. 128, 171-184 (2006).</li>
<li>Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+development+of+cyclic+nucleotide-gated+and+Ca2%2B+-activated+Cl-+currents+in+isolated+mouse+olfactory+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Temporal development of cyclic nucleotide-gated and Ca2+ -activated Cl- currents in isolated mouse olfactory sensory neurons.</a> J. Neurophysiol. 98, 153-160 (2007).</li>
<li>Sagheddu, C., Boccaccio, A., Dibattista, M., Montani, G., Tirindelli, R., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+concentration+jumps+reveal+dynamic+ion+selectivity+of+calcium-activated+chloride+currents+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+and+TMEM16B-transfected+HEK+293T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium concentration jumps reveal dynamic ion selectivity of calcium-activated chloride currents in mouse olfactory sensory neurons and TMEM16B-transfected HEK 293T cells.</a> J. Physiol. 588, 4189-4204 (2010).</li>
<li>Balana, B., Taylor, N., Slesinger, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutagenesis+and+Functional+Analysis+of+Ion+Channels+Heterologously+Expressed+in+Mammalian+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells.</a> J. Vis. Exp. (44), e2189-e2189 (2010).</li>
<li>Cygnar, K. D., Stephan, A. B., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+Responses+of+Mouse+Olfactory+Sensory+Neurons+Using+the+Air-phase+Electroolfactogram+Recording%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording.</a> J. Vis. Exp. (37), e1850-e1850 (2010).</li>
<li>Bernardinelli, Y., Haeberli, C., Chatton, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+photolysis+using+a+light+emitting+diode%3A+an+efficient%2C+compact%2C+and+affordable+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Calcium%22%5BJournal%5D)">Flash photolysis using a light emitting diode: an efficient, compact, and affordable solution.</a> Cell. Calcium. 37, 565-572 (2005).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Patch-klemp kayıtları ile birlikte kafesli bileşiklerin Flash fotoliz konsantrasyonu fizyolojik olarak aktif moleküllerin hem iç ve dış hücreleri hızlı ve yerel atlar elde etmek için çok kullanışlı bir tekniktir. Kafesli compounds1 çeşitli türlerde sentezlenen olmuştur ve bu tekniğin, kültür hücreleri aktive olabilir veya bazı kafesli bileşikler 11 fotoliz tarafından modüle iyon kanalları ifade de dahil olmak üzere hücreleri, çeşitli türleri için uygulanabilir. Kafesli bileşikleri...

<table border="1"><tbody><tr><th> Ekipman </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar </th></tr><tr><td> Mikroskop için adaptör modülü flaş lambası </td><td> Rapp optoelektronik </td><td> FlashCube 70 </td><td></td></tr><tr><td> Hava tablo </td><td> TMC </td><td> MİKRO-g 63-534 </td><td></td></tr><tr><td> Sayısallaştırıcı </td><td> Akson Aletleri </td><td> Digidata 1322A </td><td></td></tr><tr><td> Veri Toplama Yazılımı </td><td> Akson Aletleri </td><td> pClamp 8 </td><td></td></tr><tr><td> Veri Analizi Yazılımı </td><td> WaveMetrics </td><td> Igor </td><td></td></tr><tr><td> Ayna için adaptör modülü </td><td> Rapp optoelektronik </td><td> M70/100 </td><td></td></tr><tr><td> Elektrod tutucu </td><td> Akson Aletleri </td><td> 1-HL-U </td><td></td></tr><tr><td> Faraday kafesi </td><td> Özel yapılmış </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Filtre küp </td><td> Olympus </td><td> U-MWU </td><td> Tahrik olma filtre kaldırıldı </td></tr><tr><td> Flaş lamba </td><td> Rapp optoelektronik </td><td> JML-C2 </td><td></td></tr><tr><td> Forseps Dumont # 55 </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> 14099 </td><td></td></tr><tr><td> Cam kılcal damarlar </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> PG10165-4 </td><td></td></tr><tr><td> Cam alt çanak </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> FD35-100 </td><td></td></tr><tr><td> Aydınlatıcı </td><td> Olympus </td><td> Highlight 3100 </td><td></td></tr><tr><td> Ters mikroskop </td><td> Olympus </td><td> IX70 </td><td></td></tr><tr><td> Mikromanipülatörler </td><td> Luigs &amp; Neumann </td><td> SM I </td><td></td></tr><tr><td> Mikropipet Çektirme </td><td> Narishige </td><td> PP-830 </td><td></td></tr><tr><td> Izlemek </td><td> HesaVision </td><td> MTB-01 </td><td></td></tr><tr><td> Nötr yoğunluk filtreleri </td><td> Omega Optik </td><td> değişir </td><td></td></tr><tr><td> Amaç 100X </td><td> Zeiss </td><td> Fluar 440.285 </td><td> Ya Zeiss veya Olympus </td></tr><tr><td> Amaç 100X </td><td> Olympus </td><td> UPLFLN 100XOI2 </td><td> Ya Zeiss veya Olympus </td></tr><tr><td> Optik UV shortpass filtresi </td><td> Rapp optoelektronik </td><td> SP400 </td><td></td></tr><tr><td> Patch-kelepçe amplifikatör </td><td> Akson Aletleri </td><td> Axopatch 200B </td><td></td></tr><tr><td> Foto Diyot Meclisi </td><td> Rapp optoelektronik </td><td> PDA </td><td></td></tr><tr><td> Kuvars ışık kılavuzu </td><td> Rapp optoelektronik </td><td> değişir </td><td> Biz 600 mikron çapında </td></tr><tr><td> Gümüş tel </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> AGT1025 </td><td></td></tr><tr><td> Gümüş toprak pelet </td><td> Warner aletleri </td><td> 64-1309 </td><td></td></tr><tr><td> Xenon ark lambası </td><td> Rapp optoelektronik </td><td> XBL-JML </td><td></td></tr></tbody></table> <table border="1"><tbody><tr><th> Reaktif </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> BCMCM-kafesli cAMP </td><td> Biolog </td><td> B016 </td></tr><tr><td> Sığır serum albumini (BSA) </td><td> Sigma </td><td> A8806 </td></tr><tr><td> CaCl2 standard çözeltisi 0,1 M </td><td> Fluka </td><td> 21059 </td></tr><tr><td> Kafesli Ca: DMNP-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> D6814 </td></tr><tr><td> Sistein </td><td> Sigma </td><td> C9768 </td></tr><tr><td> Concanavalin A tipi V (CONA) </td><td> Sigma </td><td> C7275 </td></tr><tr><td> CSCL </td><td> Sigma </td><td> C4036 </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> Sigma </td><td> D8418 </td></tr><tr><td> DNAz I </td><td> Sigma </td><td> D4527 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> E9884 </td></tr><tr><td> EGTA </td><td> Sigma </td><td> E4378 </td></tr><tr><td> Glikoz </td><td> Sigma </td><td> G5767 </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> Sigma </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Sigma </td><td> P3911 </td></tr><tr><td> KOH </td><td> Sigma </td><td> P1767 </td></tr><tr><td> Leupeptin </td><td> Sigma </td><td> L0649 </td></tr><tr><td> MgCl2 </td><td> Fluka </td><td> 63020 </td></tr><tr><td> Papain </td><td> Sigma </td><td> P3125 </td></tr><tr><td> Poli-L-lisin </td><td> Sigma </td><td> P1274 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Sigma </td><td> S9888 </td></tr><tr><td> NaOH </td><td> Sigma </td><td> S5881 </td></tr><tr><td> NaPyruvate </td><td> Sigma </td><td> P2256 </td></tr></tbody></table>

koku duyu nöronlar cilia kafesli bileşiklerin flash fotoliz

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Kafesli bileşiklerin Fotoliz hızlı ve yerelleştirilmiş çeşitli fizyolojik olarak aktif bileşikler 1 konsantrasyonu artar üretimi sağlar. Kafesli bileşikler, ultraviyole ışığın bir flash kırılmış olabilir kimyasal bir kafes tarafından fizyolojik olarak inaktif hale moleküllerdir. Burada, ayrışmış fare koku alma duyu nöronlar koku iletimi çalışması için kafesli bileşiklerin fotoliz ile birlikte patch-klemp kayıtları nasıl elde göstermektedir. Reseptörlerine bağlanarak odorant siklik nükleotid kapılı (CNG) kanal 2 açılır cAMP artışına yol açan koku alma duyu nöronlar, kirpikler, koku alma transdüksiyon işlemi (Şekil 1) yer alır . Ca CNG kanallar aracılığıyla giriş aktive Ca-Cl kanalları harekete geçirir. Biz, fare olfaktör epitel 3 ve kafesli cAMP 4 fotoliz veya Ca 5 kafesli CNG kanalları ya da Ca-aktive Cl kanalları nasıl aktif hale getirmek için nöronların nasıl ayırmak &lt;/&gt; Destek. Biz tam hücreli gerilim kelepçe yapılandırma 8-11 patch-klemp kayıtları mevcut ölçmek için alınır uncage cAMP veya Ca ultraviyole yanıp söner siliyer bölgeye uygulamak için bir flash lamba 6,7 kullanın.

Kafesli bileşiklerin Fotoliz çeşitli fizyolojik aktif bileşiklerin konsantrasyonu hızlı ve yerelleştirilmiş artar üretimi sağlar. Burada, kafesli cAMP fotoliz ile kombine veya ayrışmış bir fare koku alma duyusal nöronlarda koku iletimi çalışma için Ca kafesli patch-klemp kayıtları nasıl elde göstermektedir.

Koku Duyu Nöronlar Cilia Kafesli Bileşiklerin Flash Fotoliz

Kafeslenmiş bileşiklerin fotolizi, çeşitli fizyolojik olarak aktif bileşiklerin konsantrasyonunda hızlı ve lokalize artışların sağlanmasına olanak tanır1. ...

Koku alma duyumuz, dış ortamdaki uçucu kimyasalları tespit etmemize ve tanımamıza olanak tanır. Kokular, olfaktör duyusal nöronların uçlarındaki reseptörlere bağlanır ve siklik nükleotid kapılı kanalların açılmasını, ardından kalsiyum aktivasyonlu klorür kanallarının açılmasını sağlayan bir transdüksiyon kaskadını aktive eder. Bu prosedürün genel amacı, kafesle korunmuş bileşikler (cage compounds) kullanılarak bu kanalların doğrudan nasıl aktive edileceğini göstermektir; kafesle korunmuş bileşikler, kimyasal bir kafes aracılığıyla fizyolojik olarak inaktif hale getirilmiş moleküllerdir.Ultraviyole ışık flaşı bir kafesi kırar ve fizyolojik olarak aktif bileşik kafeslerini serbest bırakır. Hücre içi solüsyonuna eklenen Cycl, mp veya kafes kalsiyum, patch pipetiyle doldurulur ve koku alma duyusal nöronlarının sitoplazmasına difüze olur. Tüm hücre voltaj klempleme konfigürasyonunda akımı ölçmek için patch clamp kayıtları alınırken, döngüsel MP veya kalsiyumu etkinleştirmek için kariy bölgeye ultra flaş uygulanır.Merhaba. Bugün size, kafes bileşiklerinin FE politikalarıyla birleştirilmiş patch clamp kayıtları için bir prosedür göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu prosedürü, koku sensor nö

flash-photolysis-caged-compounds-cilia-olfactory-sensory

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Multiphoton mikroskobu optik derin penetrasyon ve azaltılmış fototoksisite düşük enerjili fotonların kontrol sağlar. Biz zebrafish embriyolar canlı hücre etiketlenmesi için bu teknolojinin kullanımını anlatmayacağız. Bu protokol fotoğraf indüksiyonu için çeşitli ışık duyarlı moleküllerin kolayca adapte edilebilir.

Canlı Zebra balığı Embriyolar iki-Foton-Tabanlı fotoaktivasyon

Floresan görüntüleme için farklı omurgalı türlerin tek yaşam fotoreseptör hücrelerinin hazırlanması için bir yöntem açıklanmıştır. Yöntem, NADH ya da A vitamini gibi endojen fluorophores, floresan görüntü veya Ca duyarlı Eksojen olarak eklenmiş floresan boyalar...

Floresans Görüntüleme Living İzole Omurgalı fotoreseptör hücrelerinin hazırlanması

Biz yaşam antennal lobda koku uyarılmış kalsiyum yanıtları ölçmek ve analiz etmek için kurulmuş bir tekniği...

Koku-uyarılmış Cevaplarının Kalsiyum Görüntüleme Drosophila Antennal Lob

Bu makale, fareler koku ampulün yüzeyi harita koku uyarılmış faaliyetleri içsel optik sinyalleri ve flavoproteins otofloresans sinyallerini görüntüleme protokolleri sunar.

Optik Yansıtma ve Otofloresans Sinyalleri kullanarak, Fare Koku Ampul Görüntüleme Koku-Uyarılmış Etkinlikler

ChR2 ifade Yetişkin doğmuş nöronlar, koku alma nöral devrelerin işlevini doğru katkıları incelemek amacıyla dilim elektrofizyolojik hazırlıkları manipüle edilebilir.

Nöronlar Foto-Stimülasyon için uygun fiyatlı LED Diziler

Bu videoda, sineklerde sinaptik olarak lokalize kalsiyum sensörleri kullanılarak in vivo kalsiyum görüntüleme yöntemi gösterilmektedir. Sinekleri mikroskopi için hazırlamak, koku alma koşullandırması yapmak ve koku kaynaklı kalsiyum akışını görselleştirmek için adımları ana hatlarıyla belirtir.

In vivo (İn canlı) Drosophila melanogaster'de Sinaptik Lokalize Kalsiyum Sensörleri Kullanılarak Kalsiyum Görüntüleme

Onun küçük şeffaf gövde, iyi belgelenmiş nöroanatomi ve müsait genetik teknikler ve reaktiflerin bir dizi...

C. vivo Nöronal Kalsiyum Imaging&#39;de elegans

Bu tam hücre patch-kelepçesi ve fare beyin, akut doku dilimleri dendrit ve hipokampal nöronlar dikenler Hücre içi sodyum transient çoklu foton görüntüleme ile, nöro-aktif bileşiklerin fokal UV uyarımlı foto-aktivasyon kombinasyonunu tarif eder.

Çoklu foton İntrasellüler Sodyum Görüntüleme CA1 piramidal Nöronlar Glutamatın UV-aracılı Odak uncaging ile birlikte

Biz msn zamansal çözünürlüğe sahip membran dinamiklerinin görüntülenmesini sağlayarak elektron mikroskobu, "flaş-and-donması" içinde yeni bir teknik geliştirdi. Bu teknik, yüksek basınçlı dondurma nöron Optogenetic uyarılmasını birleştirir. Burada, prosedürleri göstermek ve ayrıntılı protokolleri açıklar.

Flaş-ve-Freeze: Elektron Mikroskobu ile Membran Dinamikler Yakalama Yeni Bir Tekniği

Sinaptik vezikül (SV) Bisiklete binme nöronal sinapslarda, hücreler arası iletişim çekirdek mekanizması vardır. FM boya alımı ve yayın kantitatif SV endo - ve ekzositozu raporlaması birincil yoludur. Burada, biz FM1-43 Drosophila nöromüsküler kavşak (NMJ) modeli sinaps Bisiklet sürmeyi tüm uyarım yöntemleri karşılaştırın.

FM sinaps Bisiklete binme boya: yüksek potasyum depolarizasyon, elektrik ve Channelrhodopsin stimülasyon karşılaştırma

Burada drosophila öğrenme ve bellek bağlamında pre-ve/ veya postsinaptik kalsiyum görselleştirilebilen bir protokol sayılmaktadır. Sinapti lokalize kalsiyum sensörleri kullanılarak yapılan in vivo kalsiyum görüntüleme, bu tür bir assosiyatif öğrenmenin altında yatan sinaptik plastisitenin belirlenebileceği klasik koku alma koşullandırma paradigması ile birleştirilir.

Drosophila melanogaster Öğrenme Kaynaklı Sinaptik Plastisite Vivo Optik Kalsiyum Görüntüleme

Öğrenin fare koku duyu nöronlarında kafesli bileşiklerin flaş fotolizi yöntemiyle siklik nükleotid kapılı kanalları nasıl aktive edeceğinizi. Patch-clamp kayıtları ile sinir sinyal iletimini inceleyin.

Koku Duyu Nöronlar Cilia Kafesli Bileşiklerin Flash Fotoliz

Daha fazla video keşfet