Name: Otolog Endotelyal progenitör Hücre-Yayımlama Teknoloji ve Büyük Hayvan Modeli Kardiyovasküler Cihazlar için Biyouyumluluk Testleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 49 s
Description: Öğrenin, otolog endotelyal progenitör hücrelerle titanyum implantları tohumlayarak trombozu önleme yöntemini. Büyük hayvan modelinde biyouyumluluk ve damar geçirgenliğini değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, bu çalışmada kullanılan domuz serum sağlamak için görüntüleme titanyum bölümleri ve İkizler Bio-Ürünler değerli tavsiye için Leica Microsystems teşekkür etmek istiyorum. Ayrıca, RC1HL099863-01 &quot;Otolog EPC astar dolaşım, biyouyumluluk yardımcı cihazlar geliştirmek için&quot; Hibe yoluyla NIH verdikleri destek için teşekkür etmek istiyorum. Ayrıca, Ulusal Bilim Vakfı Yüksek Lisans Araştırma Bursu Alexandra Jantzen destek için minnettarız. Ayrıca, cerrahi prosedür birçok açıdan yardımcı ve araştırma hayvanların işleme George Hızlı, Mike Lowe ve Ianthia Parker teşekkür etmek istiyorum. Steven Owen bizim tohumlama cihazın işleme pek çok yerinde çok değerli ve titanyum borular vardır.

1. Endotel progenitör hücre izolasyonu <ol><li> EPC numaralı seribaşı tüp implantasyonu otuz gün önce, 15 ml antikoagülan sitrat dekstroz çözeltisi ile, 60 ml şırınga hazırlamak ve EPC, periferik domuz kandan izolasyonu için 3-yollu vanasını ile güvenli. 24 saat önce kan beraberlik, Astar iki Tip 1 sıçan kolajen (50 mg / ml 0,02 N asetik asit çözeltisi içinde çözünmüş) 4 ile 12 kuyucuğu. </li><li> Ulusal Enstitüsü Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Sağlık Rehberi doğrultusunda ve sadece nezaret Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu onayından sonra, tüm hayvan bakımı ve deney gerçekleştirin. </li><li> Bir kadın Yorkshire Acepromazine sakinleştirmek ile domuz (45 kg) (1.1 mg / kg) ve Ketamin (22 mg / kg), 19 G kelebek iğne ile intramüsküler. </li><li> Endotrakeal tüp (30 cm uzunluğunda, 8 mm ID) ile domuz entübe ve İsofluranın (maske ile gelgit hacmi% 4.5) ile domuz uyutmak. </li><li> Oksijen satürasyonu, kalp hızı ve sıcaklığı ölçerek işlem sırasında domuz izleyin. Otomatik bir ısıtılmış ameliyat masasında ve ısıtma battaniyesi kullanarak ve infüze edilen sıvı ısınmanın termoregülasyon koruyun. </li><li> Domuz ameliyat masasına yatar pozisyonda yerleştirin caudolaterally arka bacaklarda, güvenli ve DuraPrep sterilizasyon takip Klorheksidin ile temizleyin. Daha sonra pelvik bölgede draping devam edin. </li><li> Femoral ven içine palpabl femoral nabız (vastus medialis ve gracilis kası lateral medial) sadece medial 5 F mikro-introducer kiti, 21 G x 7 cm iğne takın ve Seldinger tekniği kullanılarak damar cannulate. Intravasküler kateter, hazırlanan 60 ml şırınga bağlayın ve 45 ml kan çekmek. </li><li> Hemostaz (5 dk) elde etmek için damar ponksiyonu sitesi üzerinde baskı tutun, anestezi durdurma ve domuz kurtarmak. Hayvan tam iyileşme kadar takip ve kendi kafesine döndü. </li><li> Kan çözüm Hank tamponlu tuz solüsyonu ile 1:1 (CaCl 2, MgCl 2, MgSO 4 olmadan) ve eşit miktarda iyi tanımlanmış katmanlar oluşturmak için Histopaque katman sulandırınız. Santrifüj (30 dk, 740 g, düşük bir kırılma ayarı) ve toplamak mononükleer hücre (ÇUŞ) katmanı. Süspanse edin ve Dulbecco'nun Fosfat yıkama ÇUŞ x 3 tam büyüme orta iki 12-iyi plakaları (EBM-2 orta% 2 Domuz Serum (PS) ve EGM-2 ile içine kaplama önce Tuzlu (DPBS) (10 dak, 515 gr) Tamponlu SingleQuots) 37 ° ° C,% 5 CO 2. </li><li> Yavaş yavaş daha sonra ilk 7 gün, her gün her 24 saatte bir, orta değiştirin. Ortalama bir süre sonra EPC koloniler tespit 7 gün (Şekil 2). </li><li> 12-iyi bir yüzey alanı ¼ kapağı bir kez kültür EPC genişletin. Flow sitometri ile CD14 CD31 ve yokluğu, CD45 yüzey belirteçlerinin varlığı için test EPC kimlik onaylayın. Diğer testleri yapılabilir 4. akışına maruz kaldıktan sonra, hücre morfolojisi ve nitrik oksit III aktivite içerir . </li></ol> 2. Titanyum boru montaj <ol><li> HHS dilme 72 dişlere sahip boyuna Bölüm 3 eşit 120 derecelik birimleri (4,5 cm uzunluğunda) içine bir Ti borusu dikey freze testere mili tarafından yerinde tutulur gördüm. 300 RPM çalıştırın ve kesim esnasında her zaman dokunun Magic Kesme Yağı (Şekil 3) ile doymuş kesim alanı tutmak. </li><li> Lehçe bir tezgah değirmeni ve bir Scotch-Brite metal işleme simidi ile iç yüzeyi. Sonra daha da pürüzsüz ve yüzey 3M zımpara bezle elle lehçe görünür bir çukurları kaldırmak için. </li><li> Aqua regia oldukça aşındırıcı ve su altında 5 dakika, birkaç litre su 10 ile durulama ardından aqua regia (01:03 konsantre hidroklorik asit ve konsantre nitrik asit), Egzersiz son derece dikkatli takip Ti adet, Alconox sabun solüsyonu ile temizleyin Potansiyel olarak patlayıcı! </li><li> Sonikasyon Ti bölümler x 16 dk Alconox sabun çözeltisi, deiyonize su x 30 yükselişi ve deiyonize su x 16 dk tekrar sonikasyon. Laminer akış kaput kurumasını bekleyin. </li><li> 4.5 cm uzunluğunda ve 2.4 ortalama temiz Kes PVC ısı küçültmek boru. </li><li> 3 temizlenir Ti bölümleri destekleyici bir mandrel (alüminyum, 8,5 mm OD işlendi) ve Ti bölümleri etrafında PVC ısı shrink boru (Şekil 4) kol üzerine yerleştirmek için cımbız kullanın. Eşit Ti bölümleri birbirine sıkıca sarın mandrel açarken bir ısı tabancası ile şirink tüplerde. </li></ol> 3. Seeding cihaz ve montaj <ol><li> Silikon tüp, 2,5 cm ve 3,5 cm uzunluğunda kesin. </li><li> Bölüm 5 cc plastik 0.8 ml şırınga ve döner sonu ile 'başlık' tutmak. </li><li> 2 x silikon bölümleri, şırınga 'başlık' ve 2.4 'de açıklandığı gibi bir döner kap sonication iyice temizleyin. </li><li> Mikolojik monte Ti tüpün her iki ucunda, 2.5 silikon tüp ekle5 mm PVC boru üzerinde ding. </li><li> Abuts Ti borusu (Şekil 5), böylece, kısa bir silikon tüp içine şırınga 'başlık' ucu yerleştirin. </li><li> Seal Tyvek çantası ve etilen oksit gazı (18 saat 55 ° C) ile sterilize bir döner kap Ti boru montaj bitirdi. </li><li> Senkron bir zamanlama motor (10 RPH) pleksiglas bir platform üzerine monte edin ve bir şırınga tutucu (alüminyumun işlenmiş, 5 cc şırınga uyan) (Şekil 6) aks bağlamak. </li></ol> 4. EPC-Ti tüp iç yüzeyi tohumlama <ol><li> 1 altında izole olarak EPC genişletin. T-75 şişeler 3 konfluent (veya en az 9 x 10 6 hücre). </li><li> Ameliyat günü, uzun vadeli boya (PKH26) 11 ile floresan etiket hücreleri. Iki kez serum serbest orta kültürlü EPC durulama başlayın. Dikkat etiketleme sırasında ve sonrasında hücreleri korumak için ışık maruz kalma sınırı. </li><li> 4 dakika boyunca oda sıcaklığında Dilüent C 4 mcM PKH26 (boya solüsyonu) ile hücreleri örtün. </li><li> Eşit miktarda boya çözüm domuz serumu ekleyerek reaksiyon etiketleme durdurun. Bir dakika sonra, tam büyüme ortamı ile birlikte çözüm 01:01 sulandırmak. </li><li> Sıvı aspire edin ve tam besi hücreleri x 3 durulayın. </li><li> (CaCl 2, MgCl 2 olmadan) iki kez DPBS EPC yıkayın. </li><li> 3 dakika 37 tripsin ve inkübe hücreleri ° C Kapak ve ışık mikroskobu altında dekolmanı onaylamak. Kullanılan tripsin çift ses tripsin Nötralizasyon Çözüm ekleyin. </li><li> Pipetleme tarafından tek bir tüp ve karışımı içine hücre çözümleri birleştirin. 10 ul hücre çözüm saymak için bir hemasitometre her tarafına ekleyin. </li><li> Santrifüj hücre çözümü (1500 RPH, 5 dk.) 2 hücreleri ve tekrar süspansiyon pelet sayısı 2.5 x 10 6 EPC / ml serum serbest ortamda. Boru montaj 4,5 ml doldurmak için minimum hacim unutmayın. </li><li> Steril alan için biyolojik kaput steril havlu yerleştirin. Açık gaz steril steril sahaya Ti boru montaj ve ilave 5 cc şırınga. </li><li> Steril eldiven, 5 cc şırınga pistonu kaldırmak ve daha sonra kullanmak üzere alan üzerinde tutmak. Bu şırınga sabitleyiniz döner kap. </li><li> Pipetleyin 4.5 - 4.9 altında açık şırınga varil içine 5 ml EPC süspansiyon. Piston geri şırınga açık ucunu güvenli bir şekilde yerleştirin. </li><li> Yukarı kap şırınga tutun ve kapağı çıkarın. Ti tüp içinde ilerleme yok; rahatça kadar ilk döner sonuna Ti boru montaj açık silikon tüp içine şırınga takın. </li><li> Avans şırınga pistonu yavaş yavaş hücre çözümü kabarcıklar sistemden kaldırma ', baş parça kesme şırınga üst ulaşana kadar. Luer kapağı ile kapatın ve tüm montaj bandı ile sızdırmazlık, açık ucunu steril kılıf içine yerleştirin. </li><li> Tüm bu meclis 3.7 işlenmiş şırınga tutucunun içine yerleştirin. 37 inkübatörde Yeri ° C ve tohumlama odasının bu Ti tüp kısmı su seviye göstergesi (Şekil 6) kullanarak, böylece bir platform ayarlayın. </li><li> Ti boru montaj implantasyon 30 dakika önce döndürmek için izin verin. </li></ol> 5. Domuz vena kavaya Ti tüp implantasyonu <ol><li> Ameliyat öncesinde yirmi dört saat, Fentanil bir patch (yama yer x 72 saat 100 mg / saat transdermal) ile domuz premedicate (EPC izole edildiği). </li><li> Domuz NPO gecede tutun ve ameliyat günü (5 mg / kg, IM) ve 7 gün süreyle antibiyotik profilaksisi olarak her 24 saatte bir, aşağıdaki preoperatif Baytril (Enrofloxacin) yönetmek. </li><li> Sakinleştirmek, entübe ve 1.3 altında açıklandığı gibi domuz uyutmak (10 -15 ml / kg tidal volüm) ve ameliyathane masaya yatar pozisyonda domuz güvenli. Oksijen satürasyonu, kalp hızı ve sıcaklığı ölçerek işlem sırasında domuz izleyin. Otomatik bir ısıtılmış ameliyat masasında ve ısıtma battaniyesi kullanarak ve infüze edilen sıvı ısınmanın termoregülasyon koruyun. </li><li> , 18 G IV kateter domuz kulak damar içine yerleştirin ve Vetropolycin göz damlaları ile domuz gözleri korumak. </li><li> Temiz, hazırlık ve 1.6 olarak domuz karın asmak. Kaudal son meme bezlerinin cranially 2. 2. # 15 neşter bıçak ile orta hat İnsizyon. </li><li> Elektrokoter ile karın fasya diseksiyonu aşağı taşıyın. </li><li> Sivrisinek forseps ile periton kaldırın ve Metzenbaum makası ile dikkatlice girin. </li><li> Mesane Externalize ve 3-O Vicryl çanta-string sütür mesane duvar içine yerleştirin. Onun ortasında bir bıçak kesi yerleştirin ve 16 F Foley kateter yerleştirin. Idrar çıkışı titre intravenöz sıvılar (Laktat Ringers) Yönetici&gt; / = 1 ml / kg / saat ameliyat sırasında. </li><li> Sonra, ince ve kalın bağırsak ve yeri iki Balfour cerrahi retraktörlere peritoneal kavitenin posterior yönünü ortaya çıkarmak ve inferior vena kava (IVC) tanımlamak için dışa. </li><li> Dikkatli, keskin ve künt diseksiyon IVC dokusu çevresindeki ücretsiz ve IVC distal bifurkasyon proksimal sağ renal arter damar deri bir kemik. IVC bile çok küçük bir kusur hayvan hızlı kanama ve exsanguination neden olabileceğinden IVC diseksiyonu sırasında son derece dikkatli olun. </li><li> Implante Ti tüp etrafında kanama olacağı sağlamak için IVC segmentinde tüm yan dalları Arter. Çok dikkatli diseksiyon ve ligasyon gerektiren genellikle büyük iki posterior lomber venler unutmayın. Ayrıca, IVC bifurkasyosunda hemen proksimal, büyük bir lumbar ven genellikle posteromedial tarafında karşılaştı ve ücretsiz ve kelepçe yerleştirme için hazırlık gemi döngüler ile kontrol disseke olmalıdır unutmayın. </li><li> Ti tüp aynı anda 4 altında belirtildiği gibi tohumlama ile devam edin. </li><li> 100 USP / kg heparin hemen önce IVC sıkma yönetin. IVC ve lumbar ven distalde 45 derecelik açı cerrahi kelepçeler yerleştirin ve sonra proksimale. </li><li> Potts makas ile uzantısı takip # 11 neşter bıçak kullanarak proksimal ve distal kelepçeler arasında uzunlamasına veinotomy (4 cm) oluşturun. </li><li> IVC herhangi bir kan boşaltın ve iç lümen steril DPBS ile yıkayın. </li><li> Şimdi IVC içine yerleştirin ve EPC numaralı seribaşı Ti borusu (veya çıplak metal kontrolü), kurumasını hücreler önlemek ve hava tahliye DPBS (CaCl 2, MgCl 2) ile doldurun . </li><li> Veinotomy 4-0 Prolen çalışan sütür ile kapatın ve arka kanama küçük bir miktar ile de hava IVC bir proksimal klemp kaldırmak. Zamanla implant göçü önlemek için PVC boru içine damar duvarına bir 'stay-dikiş' koyun. </li><li> 2-O Vicryl (sütürlerinin) ile BT iğne ve subkutan alan O-PDS ile fasya kapatın. Zımba ile cilt kapatın. </li><li> 20 ml kadar kesi boyunca subkutan% 0.25 Marcaine (Bupivakain) Yönetici ve gazlı bez ve Tegaderm yara kapsayacak. Subkutan olarak ağrı için gerekli Flunixin (2.2 mg / kg S 24 saat) ve Oxymorphone (4 saat 0.15 mg / kg 'Q 3) vermek. </li><li> Anestezi durdurun, uyanık kadar domuz izlemek ve kafes dönmek. Sıkıntı / ağrı, ayakta durma ve ambulasyon, dışkı ve idrar çıkışına ve ten rengi normal perfüzyon gösteren işaretleri için günde iki kez domuz izleyin. </li></ol> 6. Ti tüp, kaçırmanın <ol><li> 3 hafta sonra, oturaklı, entübe ve 1.3 'de açıklandığı gibi domuz uyutmak - 1.4. </li><li> 5.8 - 5.5 'de açıklandığı gibi bir laparotomi ile devam edin. </li><li> Ancak in situ sert Ti tüp palpe skarlasma implant yeri gizlemek unutmayın. </li><li> 5.9 de açıklandığı gibi IVC teşrih - 5.11 ve Ti tüp ağır makas ile çevredeki IVC ile en-blok eksplant. </li><li> Euthasol ötenazi çözüm (390 mg / ml pentobarbital Sodyum ve 50 mg / ml Fenitoin Sodyum 1 ml / 10 lbs) ile hayvan Euthanize. </li></ol> 7. Fiksasyon ve görüntüleme Ti iç yüzey <ol><li> DPBS çözüm Ti tüp ile ven segmenti eksize durulayın ve yüksek çözünürlüklü bir dijital kamera (Şekil 7) ile lümen (patent veya tıkalı) fotoğraf. </li><li> Ardından, 15 dakika en az% 3.7 paraformaldehid dalma örnek düzeltmek. DPBS çözümü numune durulayın. </li><li> Çok dikkatli bir şekilde çevredeki ven ve Ti borusu açmak için PVC boru insizyon. Floresan kırmızı / turuncu renk (Şekil 8A) PKH26-etiketli EPC görselleştirmek için 550 nm dalgaboyu / ışık kaynağı ve görüntü altında objektif bakan iç yüzeyleri ile mikroskop altında 3 bölümden yerleştirin. İsterseniz, hücreler (örneğin, Platelet Endotel Hücre Adezyon Marker (PECAM hücre kenarlıkları (Şekil 8B), çekirdekleri görselleştirmek için DAPI leke vb görselleştirmek için)-leke) daha da lekeli olabilir. </li></ol> 8. Temsilcisi sonuçları: Bu protokolün uygulanması sonrasında, doktorlar ve bilim adamları, büyük bir hayvan modeli otolog kan endotel progenitör hücreler ile katı tüp yapıları endothelialize mümkün. Şekil 2 yöntemi ile izole EPC arnavut kaldırımlı morfolojisi ile yaklaşık 7 gün sonra koloniler olarak görünür kültürü. Şekil 5 ve 6 gösterildiği tohumlama cihazı, steril koşullar 9 altında tüp iç yüzeyi düzgün kapsama EPC süspansiyon ve sonuçları ile dolu Ti tüpler yavaş dönüşü sağlar . Bizim implantasyon cerrahisinde büyük bir hayvan modelinde tromboz, Ti gibi Biyomalzemelerin eğilimi, test etmek için izin verir. Biz domuz bu yordamı iyi tolere olduğunu ve bu implantasyon sadece az kan kaybı ve EPC katman kesinti olmadan elde edilebilir bulundu. Ayrıca, bizim EPC çizgili tüp inferior vena kava protrombotik düşük kesme ortamda bile patent kalır ise çıplak bir Ti tüp tamamen tıkar ki t "&gt; Şekil 7 göstermektedir. floresan etiketli konfluent tabakası hücrelerinin varlığını teyit Bu yöntemin başarı olarak Şekil 8'de gösterilmiştir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3197/3197fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 otolog endotelyal progenitör hücre (EPC) tohumlama deneyi şematik. İlk olarak, periferik kan domuz çizilir. Sonra, EPC kandan izole ve kültür genişledi. EPC sonra cerrahi hücreler izole edildiği aynı domuz inferior vena kava içine implante bir titanyum (Ti) tüp cihaz, sonra satır için kullanılır. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3197/3197fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 kültür EPC, izolasyon prosedürü izleyerek yaklaşık 7 gün (Görüntüleme kamera ve QCapture yazılım ters bir Leica DMIL mikroskobu ile görüntülenmiş) Temsilcisi koloni. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3197/3197fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Montajdan önce Şekil 3 Ti tüp bölümlerini. Ti boru boyuna 3 eşit bölüme kesme ve daha sonra 4,5 cm uzunlukta kesilir. Ti bölümlerde iç yüzeyleri görünür çukurları kaldırmak için bir tezgah taşlama ve zımpara bezi kullanarak parlatılır. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3197/3197fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4 PVC ısıyla daralan boru (mavi) ve ısı tabancası ile Ti tüp bölümlerini Meclisi. Ti bölümleri, Ti bölümleri uzanır ve Ti tüp iç çapı boyutları ile eşleşen bir işlenmiş alüminyum mandrel desteklenmektedir. <img alt="Şekil 5" src="/files/ftp_upload/3197/3197fig5.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 5"> Şekil 5, tüm bileşenleri gösteren Titanyum tüp tertibatı, döner kapağı, şırınga 'başlık' silikon tüp, ve Ti borusu, PVC wrap (mavi ). Meclis cerrahi kullanım için sterilizasyon için önce birlikte alınır. <img alt="Şekil 6" src="/files/ftp_upload/3197/3197fig6.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 6"> Şekil 6, motor, platformu gösteren kuvöz içinde Ti tüp tohumlama kurulum, işlenmiş alüminyum şırınga tutucu, Ti boru montaj ve 5 cc şırınga . Not: Montaj görselleştirme amaçlı steril koruyucu kılıf olarak gösterilir. <img alt="Şekil 7" src="/files/ftp_upload/3197/3197fig7.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 7"> Şekil 7 implantasyon cerrahisi Temsilcisi brüt domuz inferior vena kava (IVC) implantasyon sonrası (A) kontrolü çıplak metal Ti tüp End görünümü. Tüp lümen sağlam bir pıhtı ile tamamen tıkalı (B) EPC numaralı seribaşı Ti tüp sonu görünümü, implantasyon sonrası . Tüp lümen tamamen patent ve net. Kontrolü (C) Dissected görünümü (çıplak) Ti tüp, 3 gün implantasyon sonra, tromboz ölçüde (deneyler aynı sonuçları ile süresi 3 hafta kadar yapılmıştır) . <img alt="Şekil 8" src="/files/ftp_upload/3197/3197fig8.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 8"> 3 gün implantasyon sonrası Ti tüp yüzey Şekil 8 EPC (QImaging QICAM dik bir Leica DMRB mikroskobu ile görüntülenmiş, dijital kamera ve Image Pro Plus yazılımı tek renkli) . (A) yüzeye Konfluent hücrelerin PKH26 ameliyat öncesi etiketleme gösteriyor. (B) EPC konfluent katmanı. Kırmızı: PKH26 ameliyat öncesi etiketleme. Yeşil: EPC PECAM-leke.

<ol><li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+bleeding+and+clotting+in+the+cardiac+surgery+patient%3A+from+vascular+endothelium+to+circulatory+assist+device+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of bleeding and clotting in the cardiac surgery patient: from vascular endothelium to circulatory assist device surface.</a> Circulation. 122, 2068-2077 (2010).</li>
<li>Achneck, H. E., Sileshi, B., Lawson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+the+biology+of+bleeding+and+clotting+in+the+surgical+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular%22%5BJournal%5D)">Review of the biology of bleeding and clotting in the surgical patient.</a> Vascular. 16, 6-13 (2008).</li>
<li>Arvidsson, S., Askendal, A., Tengvall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+plasma+contact+activation+on+silicon%2C+titanium+and+aluminium%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Blood plasma contact activation on silicon, titanium and aluminium.</a> Biomaterials. 28, 1346-1354 (2007).</li>
<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biocompatibility+of+titanium+cardiovascular+devices+seeded+with+autologous+blood-derived+endothelial+progenitor+cells%3A+EPC-seeded+antithrombotic+Ti+Implants%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The biocompatibility of titanium cardiovascular devices seeded with autologous blood-derived endothelial progenitor cells: EPC-seeded antithrombotic Ti Implants.</a> Biomaterials. 32, 10-18 (2011).</li>
<li>Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+pig+models+of+venous+thrombosis+mimicking+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease.</a> Thromb Haemost. 89, 256-263 (2003).</li>
<li>Ueberrueck, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+ovine+and+porcine+animal+models+for+biocompatibility+testing+of+vascular+prostheses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of the ovine and porcine animal models for biocompatibility testing of vascular prostheses.</a> J Surg Res. 124, 305-311 (2005).</li>
<li>Velik-Salchner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+values+for+thrombelastography+%28ROTEM%29+and+selected+coagulation+parameters+in+porcine+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Normal values for thrombelastography (ROTEM) and selected coagulation parameters in porcine blood.</a> Thromb Res. 117, 597-602 (2006).</li>
<li>Yoder, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redefining+endothelial+progenitor+cells+via+clonal+analysis+and+hematopoietic+stem%2Fprogenitor+cell+principals%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals.</a> Blood. 109, 1801-1809 (2007).</li>
<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAchneck%2C+HE+%22American+Heart+Association+Scientific+Sessions%2C+Abstract+Oral+Sessions%2C+Medical+Aspects+End+Stage+Heart+Failure%3A+Transplantation+and+Device+Therapies%22">American Heart Association Scientific Sessions, Abstract Oral Sessions, Medical Aspects End Stage Heart Failure: Transplantation and Device Therapies</a>. , (2010).</li>
<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerating+titanium+ventricular+assist+device+surfaces+after+gold%2Fpalladium+coating+for+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Regenerating titanium ventricular assist device surfaces after gold/palladium coating for scanning electron microscopy.</a> Microsc Res Tech. 73, 71-76 (2010).</li>
<li>Ford, J. W., Welling, T. H., Stanley, J. C., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKH26+and+125I-PKH95%3A+characterization+and+efficacy+as+labels+for+in+vitro+and+in+vivo+endothelial+cell+localization+and+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">PKH26 and 125I-PKH95: characterization and efficacy as labels for in vitro and in vivo endothelial cell localization and tracking.</a> J Surg Res. 62, 23-28 (1996).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada sunulan hücre-ekim Ti tüpler yöntem hızlı ve düzgün endothelialize doktorlar ve bilim adamları kan ile temas eden yüzeyleri implante edilebilir cihazlar. Izole etmek ve periferik kan örnekleri EPC genişletmek yılından bu yana, önemli bir invaziv prosedür bu hücrelerin hasat için gereklidir. Ayrıca, EPC otolog, bu nedenle hücre numaralı seribaşı implant için herhangi bir immün reaksiyon riskini ortadan kaldırır. Onun protokolde gösterilen ilkeler Ti tüpler için değil sadece, ama birçok diğer biyomateryaller, kardiyovasküler tıp alanında kullanılmaktadır kullanılabilir. Bu protokol Kritik adımlar bulduğumuz gibi, Ti tüpler titiz bir temizlik olduğunu kirletici tavizler hücre bağlılığın herhangi bir yandaşı bir film. Ayrıca, yavaş bir dönüş hızı (boru çapı ile ters orantılıdır) tohumlama işlemi sırasında önemlidir, öyle ki EPC, yavaş yavaş yerleşmeye ve Ti borusu hareket olarak yüzeye yapışır. Implantasyon öncesi hemen ekim yöntemi pratik ex vivo kültür kez önler, hücreleri tek tek yapışır ve daha sonra, hemen akışının yeniden kurulması ardından bir yaprak gibi embolizasyon imkanı kaçınarak, in vivo olarak konfluent sayfalık formu. Bizim önceki çalışmalar, EPC konfluent bir katmana büyüdü sonra, ek olarak endotel bir levha olası dökülmesi en aza indirmek, onlar sıkıca yapışır ekstra bir matriks yaptığınız göstermektedir. Embolik dekolmanı olasılığı tamamen göz ardı rağmen, tüm aygıt yüzeyinin trombozu daha multifold düşük risk, bu tedavinin önlemek için tasarlanmış olduğunu sorun gibi görünüyor. Düşük kesme içine implantasyonu Bizim yaklaşımımız, inferior vena kava protrombotik ortam kan uyumluluk ve cihazlar 5,6 trombozu araştırmak için en güvenilir büyük hayvan modellerinde kullanmaktadır. Tüm hayvan bakımı ve deney Ulusal Enstitüsü Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Sağlık Kuralları ve sadece Duke Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu onayından sonra uygun yapılmıştır unutmayın. Biyomalzemeler ve cihazları test etmek için bu implantasyonu yöntemi başarıyla yararlanmak için, sabırla IVC segmentinde iskeletini, cihazın etrafında kanama bir &#39;yalancı lümenin&#39; çıktığını cihazın yerleştirilmesi için hazırlık tüm venöz şube gemileri, Arter önemlidir. Diğer önemli adım, iç tüp yüzey hücreleri veinotomy kapatılması sırasında nemli kalır ve reperfüzyon başlamadan önce olduğu gibi cihaz lümenine ek DPBS. Cihaz implante yerini tespit edilemezse, IVC &#39;upstream&#39; göç etmiş olabilir. - Bu 3 mm PVC boru bölümünde tüp bugünkü konumu iyice demirlemiş böylece damar duvarının üzerinden 2 ile dikiş (4-O Prolen) koyarak engelledi olabilir. Araştırmacı, bir başka patent tüp eksplantasyonu sonra Şekil 8&#39;de gösterilen floresan önceden etiketli hücreleri bulmakta zorluk olması halinde, bu hücrelerin tutarlı bir sayfa olarak soyulmuş olması muhtemeldir . Bu tüp ile birlikte ven sabitleme sonra, 3 Ti tüp bölümlerini çevreleyen damar ve dis-montaj çok nazik diseksiyon ile önlenebilir. Teknolojimiz, EPC-tohumlama yoluyla kardiyovasküler cihaz trombozu önlemek için proof-of-concept sağlar. Bu teknoloji, hastanın kendi endotel progenitör hücreleri ile kaplı &#39;biyojenik&#39; implantların geliştirilmesinde kullanılıyor olabilir. Bizim domuz hayvan modelinde klinik pratikte bu &#39;kişiye özel tıp&#39; Çeviri doğru ilk adımları için fizibilite çalışması sağlar.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif </td><td> Firma Adı </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Acepromazine </td><td> Boehringer-Ingelheim </td><td> BIC670025 </td><td> NAC # 10280002 </td></tr><tr><td> Alconox Powered Hassas Temizleyici </td><td> Alconox </td><td> 1104 </td><td></td></tr><tr><td> Balfour Cerrahi Retraktör </td><td> Adler </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Baytril </td><td> Bayer </td><td> APVMA 46028/0705 </td><td></td></tr><tr><td> Kelebek İğne (19G) </td><td> Terumo </td><td> SV19CLK </td><td></td></tr><tr><td> Klorheksidin </td><td> 3M </td><td> 9200 </td><td></td></tr><tr><td> Kelepçeleri (45 derece) </td><td> Aesculap </td><td> FC339T </td><td></td></tr><tr><td> DPBS (-/-) </td><td> Gibco </td><td> 14190-144 </td><td></td></tr><tr><td> DPBS (+/+) </td><td> Gibco </td><td> 14040-133 </td><td></td></tr><tr><td> DuraPrep </td><td> 3M </td><td> 8635 </td><td></td></tr><tr><td> EBM-2 Orta </td><td> Lonza </td><td> CC-3156 </td><td> Hem serum serbest ve tam büyüme orta taban </td></tr><tr><td> EGM-2 SingleQuots </td><td> Lonza </td><td> CC-3162 </td><td> EBM-2 ile hem de serum serbest ve tam büyüme orta kullanılır </td></tr><tr><td> Elektrokoter Aracı </td><td> Valleylab </td><td> SurgII-20 </td><td></td></tr><tr><td> Zımpara bezi </td><td> 3M </td><td> 60-0700-0425-8 </td><td> 240 grit </td></tr><tr><td> Euthasol Ötenazi Çözümü </td><td> Virback Hayvan Sağlık </td><td></td><td> ANADA #: 200-071 </td></tr><tr><td> Fentanil Patch </td><td> Actavis </td><td></td><td> NDC # 67767-120-18 </td></tr><tr><td> Flunixin </td><td> Schering-Plough </td><td></td><td> NAC #: 10470183 </td></tr><tr><td> Foley Kateter (16F) </td><td> Ozan </td><td> 730116 </td><td></td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Sigma </td><td> H8264-500ML </td><td></td></tr><tr><td> Isı tabancası </td><td> Milwaukee </td><td> 8988-20 </td><td></td></tr><tr><td> Heparin </td><td></td><td></td><td> NDC #: 25021 </td></tr><tr><td> Histopaque-1077 </td><td> Sigma </td><td> H8889-500ML </td><td></td></tr><tr><td> Entübasyon Tüpü </td><td> Mallinckrodt </td><td> 86113 </td><td></td></tr><tr><td> İsofluranın </td><td> MWI, Meridian </td><td></td><td> NDC # 13985-030 </td></tr><tr><td> IV Kateter (18G) </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 381547 </td><td></td></tr><tr><td> Ketamin </td><td> Fort Dodge </td><td></td><td> NDC # 0856-2013 </td></tr><tr><td> Seviye </td><td> Swanson </td><td> LLA001 </td><td></td></tr><tr><td> Luer-Lock ucu kapağı </td><td> KML Kaynağı </td><td> 909-001 </td><td></td></tr><tr><td> Marcaine </td><td> Hospira </td><td></td><td> NDC #: 0409-1560-10 </td></tr><tr><td> Metzenbaum Makas </td><td> Adler </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Micro-introducer (5F) </td><td> Galt </td><td> KIT 002-01 </td><td></td></tr><tr><td> Sivrisinek Forseps </td><td> Adler </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Motor </td><td> Herbach ve Rademan </td><td> H1-08 </td><td></td></tr><tr><td> Oxymorphone </td><td> Endo Labs </td><td></td><td> NDC: 63481-624-10 </td></tr><tr><td> PKH26 Boya Seti </td><td> Sigma </td><td> PKH26GL-1KT </td><td></td></tr><tr><td> Domuz Serum </td><td> İkizler Bio-Ürünler </td><td> 100-115 </td><td> % 2 konsantrasyonu tam besi </td></tr><tr><td> Potts Makas </td><td> Adler </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Hassas Vista Cilt Zımba </td><td> 3M </td><td> 3998 </td><td></td></tr><tr><td> PVC Boru </td><td> McMaster-Carr/Insultab </td><td> 7132K117 </td><td> ID 15,88 mm genişletilmiş ID 7.95 mm kurtarıldı </td></tr><tr><td> Sağ Açı Orta Ölçekli </td><td> Adler </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Neşter Blade (# 10-15) </td><td> Ozan </td><td> 373910 </td><td></td></tr><tr><td> Silikon Boru </td><td> McMaster-Carr </td><td> 51735K26 </td><td> OD 16,64 mm, 9,52 mm ID </td></tr><tr><td> Şırınga (5 cc) </td><td> Becton-Dickinson (BD) </td><td> 309603 </td><td></td></tr><tr><td> Tegaderm </td><td> 3M </td><td> 90001 </td><td></td></tr><tr><td> Üç şekilde Musluk </td><td> Kendall </td><td> 170060 </td><td></td></tr><tr><td> Ti Tube </td><td> Tico Titanyum </td><td> N / A </td><td> Olarak ½ &quot;OD, 0,065&quot; duvar, 0,370 &quot;Kimlik, .1737 lbs / ft belirtilir </td></tr><tr><td> Tripsin </td><td> Lonza </td><td> CC-5012 </td><td></td></tr><tr><td> Tripsin Nötralleştirme Çözüm (TNS) </td><td> Lonza </td><td> CC-5002 </td><td> % 0.03 </td></tr><tr><td> Vetropolycin </td><td> Pharmaderm Hayvan Sağlık </td><td></td><td> NAC #: 12920110 </td></tr><tr><td> Vicryl Dikiş (3-0) </td><td> Ethicon </td><td> J808T </td><td></td></tr><tr><td> Su Banyo sonikatör </td><td> Branson </td><td> B200 </td><td></td></tr></tbody></table>

otolog endotelyal progenitör hücre-yayımlama teknoloji ve büyük hayvan modeli kardiyovasküler cihazlar için biyouyumluluk testleri

Autologous Endothelial Progenitor Cell-Seeding Technology and Biocompatibility Testing For Cardiovascular Devices in Large Animal Model

Vücuda Yerleştirilebilir tromboemboli oluşumu 1,2,3 risk teşkil yapay malzeme (örneğin titanyum (Ti), genişletilmiş politetrafloroetilen), kardiyovasküler cihazlar üretilmektedir. Biz otolog kan kaynaklı insan veya domuz endotel progenitör hücrelerin (EPC) 4 Ti tüplerin iç yüzeyi hattı için bir yöntem geliştirdiler. Ti tüpler implante domuzların inferior vena kava (IVC), domuz EPC konfluent katmanı içeren, büyük bir hayvan modeli protrombotik ortamda hücre numaralı seribaşı yüzeyi gelişmiş biyouyumluluk test edilmiş ve değiştirilmemiş çıplak metal yüzeyleri karşılaştırdık 5,6,7 (Şekil 1). Bu yöntem, implantasyon dakika içinde cihazların endothelialize ve in vivo olarak antitrombotik fonksiyon testi için kullanılabilir . Periferik kan, 50 kg Yorkshire domuz ve EPC 4,8 izole etmek için kültürü mononükleer hücre fraksiyonu elde edildi . Ti tüpleri (9.4 mm ID), üç 4.5 cm boykesit içine önceden kesilmiş ve ısıyla daralan boru ile yeniden birleştirilen. Ti tüpler yavaş dönüş için olanak sağlayan bir tohumlama cihazının inşa edildi. Biz domuz bir laparotomi ve bağırsak ve mesane dışsallaştırdığı. Keskin ve künt diseksiyon proksimal sağ renal arter distalinde, çatallanma IVC iskeletini kullanılmıştır. Ti tüpler sonra, tek tip hücre kaplama 9 elde etmek için 10 RPH x 30 dakika EPC süspansiyon ve yatık otolog floresan etiketli doluydu . 100 USP / kg heparin uygulamasından sonra, IVC ve lumbar ven her iki ucunda klempe edildi. A 4 cm veinotomy ve cihaz yerleştirilir ve fosfat tamponlu tuzlu su ile doluydu. Veinotomy 4-0 Prolen çalışan sütür ile kapatıldı, bir kelepçe de hava IVC kaldırıldı. Prosedürün sonunda, fasya 0-PDS (polidioksanon dikiş) ile yaklaşık 2-0 vicryl, subkutan alan kapalı ve cilt kapalı zımbalanmış. Sonra 3 - 21 gün, domuz ötenazi, en-blok eksplante ve sabit cihaz. Ti tüpler demonte ve iç yüzeyleri bir floresan mikroskobu ile görüntülenmiş. Biz EPC numaralı seribaşı tüpleri patent kaldı ise çıplak metal Ti tüpler tam tıkalı bulundu. Ayrıca, kan ile temas eden iç yüzeyi EPC bir konfluent katmanı göstermek mümkün. Sonuç olarak, bizim teknoloji cihaz trombozu önlemek için otolog EPC implantasyon dakika içinde Ti tüpler endothelialize kullanılabilir. Cerrahi yöntem, az kan kaybı ve EPC numaralı seribaşı yüzey bozulması ile bu değiştirilmiş cihazların gelişmiş biyouyumluluk test etmek için izin verir.

Kan ile temas eden otolog hücre ve test biyouyumluluk biyomalzemeler tohumlama titanyum için bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem, cerrahi implantasyon dakika içinde domuz venae kava numaralı seribaşı endotel progenitör hücrelerin ve titanyum tüpler, kullanır. Bu teknik, diğer birçok implante biyomedikal cihazlar için uyarlanabilir.

Otolog Endotelyal progenitör Hücre-Yayımlama Teknoloji ve Büyük Hayvan Modeli Kardiyovasküler Cihazlar için Biyouyumluluk Testleri

İmplant edilebilir kardiyovasküler cihazlar, risk oluşturan yapay malzemelerden (örneğin titanyum (Ti), genişletilmiş politetrafloroetilen) üretilmektedir...

Bu deneyin genel amacı, vasküler implantları otolog kan türevli endotelyal progenitör hücreler ile ekmek ve ardından bu tedavinin büyük bir hayvan modelinde tromboz üzerindeki etkisini gözlemlemektir. Bu işlem, geç büyüme gösteren porcine endotelyal progenitör hücrelerini izole etmek için domuzlardan periferik kan örneği alınarak gerçekleştirilir. Ardından, implante edilebilir bir cihaz.Kavram kanıtlama çalışmamızdaki titanyum tüp, otolog PC'ler ile yerleştirilmiştir. Cihaz daha sonra domuzun inferior vena cava'sına implante edilir. Sonuçlar, kontrol grubu ve tıkanmış çıplak metal tüpün aksine, EPC yerleştirilmiş titanyum tüpün açıklığına dayanarak trombose karşı koruma olduğunu göstermektedir.Duke cerrahisi, çığır açıcı ve yenilikçi araştırmaları teşvik etmeye kendini adamıştır. Aşağıdaki sunum, tıbbı ilerletmek için departmanlar ve disiplinler arası nasıl çalıştığımıza dair bir örnektir. Dr. EK, vasküler cihazların kanla temas eden yüzeyini hastanın kendi progenitör hücreleriyle kaplayarak trombozu önleyecek bir hücre yerleştirme teknolojisi geliştirmek için yürütülen bir araştırma çalışmasına liderlik etmektedir.Bu hücreler, implandı alacak olan hastaların kendilerinden türetildiği için bağışıklık sistemi tarafından reddedilme riskini önlemiş oluyoruz. Başarımız ve burada açıklanan yöntemler, geniş bir ekip çalışmasının sonucudur. Cerrahi implantasyon; damar cerrahisi bölümünden Sean Gage, Duke tıp öğrencisi Whitney Lane ve şahsım tarafından gösterilecektir.Şimdi, hücre ekim sürecini ayrıntılı olarak anlatacak olan Biyomedikal Mühendisliği Bölümü'nden doktora öğrencisi Alexander Janssen'i takdim etmek istiyorum. Bir domuz modeline implantasyon yapmadan hemen önce, titanyum tüplerin kana dayalı endotelyal progenitor hücreler ile nasıl ekileceğini göstereceğim. Bu yöntem bir kavram kanıtlama çalışması niteliğindedir ve aynı temel ilkeler, nitinol stentler ve mekanik dolaşım destek cihazları gibi diğer birçok implante edilebilir cihaza da uygulanabilir. EPC'ler, domuz kanının mononükleer hücre fraksiyonunun ekilmesiyle izole edilir ve genellikle yaklaşık yedi gün sonra ortaya çıkarlar.Bu hücreler, tipik parke taşı morfolojileri ile tanınabilirler. EPC'leri kültürde toplam 9 milyon hücreye ulaşana kadar genişletin. Hazırlanan EPC'leri, etiketleme sırasında ve sonrasında ışığa maruz kalmalarını sınırlamaya dikkat ederek, serumsuz ortamda iki kez durulayın.Ardından hücreleri floresan etiket PKH 26 ile kaplayın ve ne kadar solüsyon uygulandığını kaydedin. Hücreleri oda sıcaklığında dört dakika boyunca inkube edin. Bir dakika sonra boya solüsyonuna eşit hacimde domuz serumu ekleyerek etiketleme reaksiyonunu durdurun.Birleştirilen çözeltileri, tam büyüme ortamı ile bire bir oranında seyreltin. Ardından sıvıyı aspire edin ve hücreleri üç kez tam büyüme ortamı ile, ardından iki kez yıkama ve kalsiyum veya magnezyum klorür içermeyen DPBS ile durulayın. Sonra, kullanılan hacmi kaydederek hücrelerin üzerini tripsin ile kaplayın ve 37 °C'de inkübe edin.Üç dakikalık inkübasyonun ardından, hücrelerin ayrılıp ayrılmadığını kontrol etmek için mikroskopi kullanın ve eğer ayrılmışlarsa, eklenen miktarın iki katı kadar tripsin nötralizasyon solüsyonu ekleyin. Tripsini durdurduktan sonra, hücre solüsyonlarını tek bir tüpte birleştirin ve hemositometre ile hücre yoğunluğunu ölçün. Son olarak, hücre süspansiyonunu pellet haline getirin ve hücreleri en az 4.5 milliliters serumsuz ortamda yeniden süspanse edin.Domuz ameliyata hazırlandıktan sonra, ikinci meme bezleri setinden başlayarak orta hattı 15 numara bistüri ucu ile kesin. Elektrokoter kullanarak sondan bir önceki sete kadar dikkatle ilerleyin. Diseksiyonu abdominal fasyaya kadar sürdürün.Peritonyumu sivrisinek pensi ile kaldırın ve metz makas ile dikkatlice girin, idrar torbasını dışarı çıkarın ve torba duvarına 3-0 Vicryl kese dikişi atın. Merkezinde küçük bir insizyon yapın ve insizyondan içeriye 16 French Foley kateteri yerleştirin. Ardından, cerrahi sırasında idrar çıkışını saatte kilogram başına en az bir mililitre olacak şekilde titre etmek için intravenöz sıvılar uygulayın.Ardından, genişlemiş ince bağırsağı dışarı çıkarın ve periton boşluğunun posterior kısmını açığa çıkarmak için iki adet bour cerrahi rektrakte yerleştirin ve keskin ve kör diseksiyon kullanarak IVC'yi tanımlayın. IVC'yi çevre dokulardan dikkatlice serbest bırakın. Daha sonra damarı, IVC bifurkasyonunun proksimalindeki sağ renal arterden distal uca kadar iskeletleştirin.IVC diseksiyonu sırasında aşırı dikkatli olunmalıdır; çünkü IVC'deki çok küçük bir defekt bile hızlı hemorajiye ve hayvanın kan kaybından ölmesine yol açabilir. IVC segmentinin tüm yan dallarını ligatlayın; IVC bifurkasyonunun hemen proksimalindeki iki büyük posterior lumbal venin diseksiyonu ve ligasyonu sırasında özel özen gösterin. Posterior tarafta sıklıkla büyük bir lumbal ven bulunur.Bu veni serbestçe disseke edin ve damar loopları ile kontrol altına alın. Şimdi, cerrahi ile paralel olarak, bu prosedüre başlamadan önce implantın EPC'ler ile ekimini yapmaya başlayın. Titanyum tüp doku yerleştirme iskeleleri tamamen monte edilmiş ve steril alanda kullanıma hazır olmalıdır.Gaz sterilizasyonlu titanyum tüp düzeneğini beş cc'lik bir şırıngaya yerleştirin. Ardından, pistonu beş cc'lik şırıngadan çıkarın ancak atmayın; şırıngaya sabit bir kapak takın. Şırıngayı EPC süspansiyonu ile doldurmak için bir pipet kullanın.Ardından pistonu geri takın. Kapağı çıkarın ve şırınganın giriş ucunu, tam oturana kadar düzeneğin açık silikon tüpüne yerleştirin. Daha fazla ilerletmeden, hücre solüsyonunu başlığın üst kısmına ulaşana kadar yavaşça sürerek tüm hava kabarcıklarını giderin.Ardından düzeneği bir luer kapak ile kapatın ve steril bir eldiven içinde bantla mühürleyin. Bu düzeneğin tamamını işlenmiş bir şırınga tutucuya yerleştirin ve 37 °C'lik bir inkübatöre koyun. Oturma odacıklarının düz olduğundan emin olmak için bir kumpas kullanın ve düzeneğin hafif rotasyonla inkübe edilmesini sağlayın.IVC ligasyonunun hemen ardından, domuz başına kilogram başına 100 ünite heparin uygulayarak cerrahiye devam edin. Ardından, IVC'yi distalde IVC ve lomber ven üzerinde 45 derecelik bir açıyla ve sonra proksimalde hemen klempleyin. Sonrasında, proksimal ve distal klempler arasında dört santimetrelik boyuna bir venotomi yapmak için 11 numara skalpel bıçağı ve pot makası kullanın.IVC'deki tüm kanı tahliye edin ve iç lümenini steril DPBS ile yıkayın. Hücrelerin kurumasını önlemek ve havayı tahliye etmek için, EPC yerleştirilmiş implantı veya çıplak metal kontrolü IVC'ye yerleştirin. IVC'yi kalsiyum klorür ve magnezyum klorür içeren DPBS ile doldurun.Ardından venotomiyi 4-0 prolene sürekli dikişle kapatın ve IVC'deki havayı küçük bir miktar geri kanama yoluyla boşaltmak için proksimal klemplerden birini çıkarın. Kanama gerçekleştikten sonra, implantı yerinde tutmak için distal klempi çıkarın. Ven duvarından geçen PVC tüpüne bir askı dikişi uygulayın.Fasyayı CT iğnesi üzerindeki OPDS ile kapatın. Subkutan alanı iki sıfır Vicryl ile sürekli dikişle kapatın. Ardından cildi zımba ile kapatın.Ağrıyı önlemek için insizyon bölgesi boyunca cilt altına 20 mililitreye kadar %0,25 Marcaine uygulayın ve yarayı gazlı bez ve tegaderm ile kapatın. Gerektiğinde cilt altına flu Nixon ve oksimorfon verin. Anesteziyi sonlandırın ve domuz uyandığında, sonraki yedi gün boyunca onu kafesine geri döndürün.Antibiyotik profilaksisi olarak her 24 saatte bir atri uygulayın ve cerrahi öncesinde uygulanan fentanil yamasının toplam üç gün boyunca yapışık kaldığından emin olun. Üç gün sonra, yerleştirilen titanyum tüp implantlar çıkarıldı ve iç yüzeyler incelendi. 550 nanometre eksitasyon dalga boyu altında, başka bir tüpte floresan işaretli hücrelerden oluşan konfluen bir tabaka tespit edildi.Hücre sınırlarını görselleştirmek için kesit hücreleri ek olarak bir trombosit endotelyal hücre adhezyon belirteci ile boyanmıştır. Bu prosedürde çok çeşitli boyalar kullanılabilir. Buna karşılık, çıplak bir titanyum tüp implant, vena cava inferior'un protrombotik düşük paylaşım ortamında tamamen tıkanır.Görüntü A ve C'de gösterildiği gibi, hücre yerleştirilmiş titanyum tüp görüntü B'de görülmektedir ve periferik kanla yapılan izolasyon prosedürümüzün ardından pıhtı oluşmadan kalmıştır. EPC'ler kültürde ortalama yedi gün sonra görülür. Cerrahi işlem sırasında, IVC'yi hem dikkatli hem de nazik bir şekilde iskeletleştirmek çok önemlidir; çünkü IVC'de veya yan dallarında meydana gelebilecek en küçük yırtılma bile domuzun kan kaybından ölmesine yol açabilir. Bu prosedürün ardından, trombozu önlemek için kanla temas eden diğer materyaller hızla endotelleşebilir.Örneğin, EPC'lerimizle kaplanmış endotelyal vasküler stentler, kan damarı duvarının doğal astarını taklit eder ve geliştirilmesinden sonra stent restenozunu ve trombozu önleyebilir. Hızlı görme teknolojimiz, intravasküler cihazların hastanın kendi kanından elde edilen endotelyal progenitör hücrelerle ameliyathanede veya kateterizasyon laboratuvarında birkaç dakika içinde kaplanmasına olanak tanıyacaktır. Bu sayede, uzun süreli ex vivo kültür ihtiyacı ortadan kalkar.Cihaz üzerindeki işlem süresi önlenmiş olur ve teknoloji, klinik uygulamaya aktarılabilir hale gelir.

autologous-endothelial-progenitor-cell-seeding-technology

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Endotel progenitör hücrelerin koloni oluşturan (ECFCs) vasküler homeostazı ve onarım çalışması için bir gelecek vaat eden bir araçtır.

İzolasyon ve Büyük Ölçekli Genişleme Yetişkin İnsan Endotel Koloni Oluşturan Progenitör Hücreler

Burada, biz insan kordon kanı endotel koloni oluşturan hücrelerin (ECFCs -) ve kemik iliğinden elde edilen bağışık yetmezliği olan farelere subkutan kollajen / fibronektin jel gömülü mezenkimal kök hücreler (MKH), teslim etmek için bir metodoloji tarif Bu hücre / jel kombinasyonu, fare damarsal ile bağlayan bir insan bir damar ağı oluşturur.

Bağışık yetmezliği olan farelere Biyomühendislik İnsan Mikrovasküler Ağları

Hücresel ve moleküler neotissue oluşumu hakkındaki bilgi geliştirmek için, TEVG bir fare modeli yakın zamanda geliştirilmiştir. Greftler C57BL / 6 farelerinde Infrarenal vena kava araya girme greft olarak implante edildi. Bu model bizim klinik araştırmada elde edilenlere benzer sonuçlar elde, ama çok kısaltılmış zaman zarfında.

Fare Modeli Inferior Vena Cava İnterpozisyon Greft İmplantasyonu

Hayvan kurban kadar in vivo uçtan uca anastomoz ve gerçek zamanlı dijital değerlendirme kullanarak bir koyun karotis artere Doku Engineered Gemiler (Tevs) arası pozisyonel yerleştirme için bir adım-adım protokolü.

Doku Engineered Vasküler Greftlerinin ve sonraki İmplantasyonunda Cerrahi Tekniği<em&gt; İn Vivo</em&gt; İzleme

Burada, biz çift tohumlama kısmen uyarılmış pluripotent kök hücre ile farelere aşılama için fonksiyonel doku mühendisliği gemi greft oluşturmak için bir protokol mevcut (PiPSC) - Bir decellularized damar iskele biyoreaktör üzerinde elde edilen endotel hücreleri - düz kas hücreleri ve PiPSC türetilmiş.

Bir Fare Modeli Doku mühendisliği Kapların Üretimi ve Tırnak

Bu izole edilmiş ve iyi karakterize edilmiş bir ortamda in vivo damarlanmayı analiz etmek için bir model olarak bir arteriovenöz (AV) döngü üretilmesi için bir mikro yaklaşımı açıklar. Bu model yalnızca anjiyojenezde araştırılması için yararlıdır, ama aynı zamanda en iyi şekilde mühendislik eksenel vaskülarize ve transplante dokuların için uygundur.

Bir Küçük Hayvan Modelinde Arteriovenöz (AV) Döngü Anjiogenez ve Vaskülarize Doku Mühendisliği Eğitim için

Şu anda bozukluklarına bileşik allotransplantation her türlü uzun-vadeli-immünosupresyon, hayat kritik olmayan endikasyonları desteklemek zor bağlıdır. Biz kemik VCA çalışma ve kemik canlılığı uzun süreli bağışıklık modülasyonu, gerek kalmadan korumak için cerrahi angiogenez kullanımını göstermek için kullanılan yeni bir domuz tibial VCA modeli mevcut.

Domuz Tibial Allotransplantation cerrahi angiogenez: bileşik Allotransplantation Model yeni bir büyük hayvan kemik skarların

Burada, yeni kardiyokoruyucu stratejileri araştırmak için sıkı bir şekilde kurulan ve kullanılan ortootopik kalp transplantasyonunun klinik öncesi büyük hayvan (porcine) modelini tarif ediyoruz.

Ortootopik kalp transplantasyonunun klinik öncesi porcine modeli

Bu protokol, kalp yetmezliği ni modelleyen enfarktan farelerin epikardiyumuna 3Boyutlu biyobaskılı bir yama naklini amaçlamaktadır. Anestezi, cerrahi göğüs açıklığı, sol anterior inen kalıcı ligasyon (LAD) koroner arter ve kalbin enfarktüs bölgesine biyobbaskılı bir yama uygulaması ile ilgili ayrıntıları içerir.

Miyokard Enfarktüsü'nün Murine Modelinde 3Boyutlu Biyobaskılı Yama Transplantasyonu

Burada, doku mühendisliği yapılmış bir vasküler greftin manşet tekniği kullanılarak fare karotis arterine implantasyonu için bir protokol sunulmakta ve vasküler doku rejenerasyon mekanizmalarının araştırılması için uygun bir hayvan modeli sağlanmaktadır.

Fare Karotis Arterine Manşet Tekniği ile Doku Mühendisliği Yapılmış Vasküler Greft İmplantasyonu

Bu çalışma, femoral arterlerdeki küçük çaplı greftleri değerlendirmek için bir domuz modeli sunmaktadır. Model, insan vasküler dinamiklerini taklit eder ve greft açıklığını, hemodinamiği ve vasküler yeniden şekillenmeyi kapsamlı bir şekilde değerlendirir. Vasküler greftleri test etmek ve Doppler ultrason ve anjiyografi ile izlemek için değerli bir platform sunar.

Küçük çaplı vasküler greftleri test etmek için bir domuz modelinde femoral vasküler greft implantasyonu

Öğrenin, otolog endotelyal progenitör hücrelerle titanyum implantları tohumlayarak trombozu önleme yöntemini. Büyük hayvan modelinde biyouyumluluk ve damar geçirgenliğini değerlendirin.

Otolog Endotelyal progenitör Hücre-Yayımlama Teknoloji ve Büyük Hayvan Modeli Kardiyovasküler Cihazlar için Biyouyumluluk Testleri (Video) | JoVE Journal

Otolog Endotelyal progenitör Hücre-Yayımlama Teknoloji ve Büyük Hayvan Modeli Kardiyovasküler Cihazlar için Biyouyumluluk Testleri

Daha fazla video keşfet