Siyatik Sinir Sıçanlarda Ağrı aşırı duyarlılık Test Kronik daraltma

Bu prosedürün genel amacı, nöropatik ağrının yaygın olarak kullanılan bir kemirgen modeli olan siyatik sinir kronik konstriksiyon yaralanmasını gerçekleştirmek ve ortaya çıkan ağrı davranışlarını nicel olarak ölçmektir. Bu işlem, öncelikle siyatik sinirde bir konstriksiyon yaralanması oluşturmak için uyluğun orta seviyesinde açığa çıkarılan siyatik sinirin etrafına dört adet kromik gut ligatür yerleştirilerek gerçekleştirilir. Ardından, von fray antenleri kullanarak mekanik uyarana karşı pati çekilme eşiği ve plantar analjezi metre kullanarak termal uyarana karşı pati çekilme latansı nicel olarak ölçülerek, istenen zaman noktalarında arka patideki ağrı davranışları izlenir.

Nihayetinde, hem mekanik hem de termal uyaranlara karşı uyarılmış geri çekilme yanıtlarının ölçümü aracılığıyla, yaralanmış arka patide mekanik ve termal ağrının varlığı ile hipersensitiviteyi gösteren sonuçlar elde edilebilir. İlk olarak bene ve Z tarafından geliştirilen bu periferik sinir yaralanması yöntemi, nöropatik ağrının hangi periferik ve merkezi mekanizmalarla oluştuğu gibi kronik ağrı alanındaki temel soruları yanıtlamamıza yardımcı olabilir. Bu model, ağrı hipersensitivitesini azaltmaya yönelik yeni stratejileri incelemek için temel oluşturduğundan, bu tekniğin etkileri nöropatik ağrı tedavisine kadar uzanmaktadır.

Genellikle, bu yöntemde yeni olan kişiler, cmic bağırsak sütürlerini statik sinirin etrafına yerleştirme ve yeterli ancak aşırı olmayan sinir hasarına neden olacak uygun sıkılığı sağlama konusunda zorluk yaşarlar. Bu prosedüre başlamak için, cerrahi çalışma yüzeyini %70 etanol ile dezenfekte edin ve daha önce otoklavlanmış olan steril aletleri, gazlı bezleri, zımbaları ve pamuklu çubukları hazırlayın. Ardından, sıçanı bir indüksiyon odasında %5 ISO fluorine kullanarak anesteziye alın.

Cerrahi sırasında özel yapım bir yüz maskesi aracılığıyla %2 ISO florin uygulayın. Ardından, sıçanın sol arka bacağını tıraş edin ve hayvanı 37 °C sıcaklıktaki termo regüle bir ısıtma matına yerleştirin. Gözlere kayganlaştırıcı oftalmik pomad uygulayın.

Ardından, kromik katgüt sütürü yaklaşık üç santimetrelik küçük parçalara bölerek hazırlayın ve bunları steril salin içine daldırın. Sonra, tıraş edilen bölgeyi alkol ve iyot çözeltisini ardışık üç kez uygulayarak sterilize edin. Hayvan göğüs üstü yatırılmış haldeyken, sol arka bacağını kaldırın ve ayağına maskeleme bandı kullanarak femur kemiğini omurgaya 90 derece olacak şekilde tutun.

Ardından, femur'un yaklaşık üç ila dört milimetre altına deri üzerinden bir insizyon yapın. Bağ dokusunu keserek, deriyi insizyon çevresindeki kastan ayırın. Gluteus superficialis ve biceps fems kasları arasındaki bağ dokusunu kesmek için küt uçlu bir makas kullanın.

Ardından, siyatik sinirin net bir şekilde görüntülenmesini sağlamak için iki kas arasındaki boşluğu genişletmek üzere bir ekartör kullanın, daha sonra forseps ve mikro makas yardımıyla siyatik sinirin yaklaşık 10 milimetrelik kısmını çevreleyen bağ dokusundan nazikçe ayırın. Her bağlama için ilk ligatürü, siyatik sinirin trifurkasyonunun proksimaline bağlayın. Tek bir gevşek halka ile başlayın.

Ardından, döngüye yakın olan iki ucu kavrayın ve döngü tam olarak sıkışana ve ligatür sinir boyunca kaymayana kadar çekin. Sonra döngüyü uygun konumunda tutun ve düğümü tamamlamak için ilk döngünün üzerine ikinci bir döngü yerleştirin. Ardından, sinirin yaklaşık bir milimetrelik bir daralması minimum düzeyde olacak şekilde ligatürün boşta kalan uçlarını kesin.

Kalan üç ligatür için, her bir ek ligatürü bir öncekinden bir milimetre daha proksimale bağlayarak adımları tekrarlayın. Cerrahi işlemin sonunda, minimum konstriksiyon sağlayarak kas tabakasını kapatmak için sütürler, cildi sabitlemek için ise zımbalar kullanın. Ardından, yarayı sterilize etmek için iyot solüsyonu kullanın.

Anestezi iyileşme süreci boyunca hayvanı yakından gözlemleyin ve düz kağıt tabanlı bir altlık bulunan ayrı bir kafeste iyileşmesini sağlayın. Deneye başlamadan önce, hayvanla birkaç gün boyunca günlük olarak ilgilenin.

Ardından, davranışsal testlerden önce sıçanı kafese alıştırın. Test ortamı sessiz tutulmalı, sabit sıcaklık ve nem seviyeleri ile iyi kontrol edilmeli ve her test oturumu günün benzer bir saatinde gerçekleştirilmelidir. Test gününde mekanik geri çekilme eşiğini incelemek için, deneyden 15 ila 30 dakika önce sıçanı yükseltilmiş tel örgü tabanlı test kafesine yerleştirin; dinamik plantar von fray kullanarak dokunma stimülatörü ünitesini, filament arka patinin orta plantar yüzeyinin tam altına gelecek şekilde konumlandırın ve başlat tuşuna basın.

Bu işlem, arka patinin plantar yüzeyini artan bir kuvvetle mekanik olarak uyarmak için filamenti yukarı kaldırır. Ardından, hem yaralı hem de yaralanmamış arka patilerden mekanik geri çekilme eşiğini kaydedin. Bu cihaz, geri çekilme tepkisi sırasında uygulanan maksimum kuvveti otomatik olarak kaydeder ve görüntüler.

Mekanik stimülasyonu, stimülasyonlar arasında yaklaşık beş dakikalık aralıklarla üç kez tekrarlayın; test ve yaralanmamış arka patileri karşı dengelenmiş bir sırayla test edin ve ardından pati çekilme eşiklerinin ortalamasını hesaplayın. Test gününde termal çekilme latansını incelemek için sıçanı, deneyden 15 ila 30 dakika önce termal plantar analjezi cihazı kullanılarak cam tabanlı test kafesine yerleştirin, kızılötesi kaynağı arka patinin orta plantar yüzeyinin tam altına konumlandırın ve başlatma tuşuna basın.

Bu işlem, arka patinin plantar yüzeyini şeffaf bir cam yüzey aracılığıyla radyant ısı demetine maruz bırakır. Ardından, hem yaralı hem de yaralanmamış arka patilerdeki geri çekilme latansı kaydedilir. Bu cihaz, termal stimülasyonun başlangıcından patinin ısı kaynağından çekilmesine kadar geçen süreyi otomatik olarak kaydeder.

Isı stimülasyonunu, yaralı ve yaralanmamış arka patileri karşıt dengelenmiş bir sırayla test ederek, stimülasyonlar arasında yaklaşık beş dakikalık bir aralıkla en az üç kez tekrarlayın ve ardından pati çekilme latanslarının ortalamasını hesaplayın; burada, Wistar sıçanlarının yaralı ve yaralanmamış patilerinde, siyatik sinirin kronik sıkıştırılmasından önce ve sonraki 12 güne kadar olan mekanik çekilme eşiği gösterilmektedir. Yaralı ipsilateral arka patide, yaralanmamış kontralateral arka patiye kıyasla mekanik stimülasyonlara karşı pati çekilme eşiğinde anlamlı bir azalma vardır. Burada, siyatik sinirin kronik sıkıştırılmasından önce ve sonraki 12 güne kadar olan süreçte, hem yaralı hem de yaralanmamış patilerdeki termal çekilme latansı gösterilmektedir.

Benzer şekilde, termal geri çekilme latansı, yaralanmış ipsilateral arka patide, yaralanmamış kontralateral arka patiye kıyasla anlamlı derecede azalmıştır. CCI cerrahisi bir kez kavrandığında, hayvan başına 20 dakika kadar kısa bir sürede uygun şekilde gerçekleştirilebilir ve bu da arka patide uzun süreli ağrı hipersensitivitesi ile sonuçlanır. Bu prosedür uygulanırken, ligatürlerin gevşek bağlanması gerektiğini hatırlamak önemlidir; çünkü ödem sonrası ligatürlerin altındaki kendi kendine sıkışma, gelişimin ardından bir daralmaya neden olur.

Bu periferik sinir yaralanması tekniği ve beraberindeki ağrı hipersensitivitesi P dalgası testi, nöropatik ağrı alanındaki araştırmacıların sinir yaralanmasına bağlı kronik ağrının altında yatan mekanizmaları incelemelerine olanak tanır.