Name: Modelleme ve Görüntüleme 3-Boyutlu Toplu Hücre Invasion (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: Öğrenin, 3D Matrigel matrisi ve konfokal mikroskopi kullanarak tümör hücrelerinin invazyon davranışlarını nasıl analiz edeceğinizi. Bu yöntem, lider ve takipçi hücrelerin rollerini belirleyerek kanser ilerlemesini daha iyi anlamanıza yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma için fon Cancer Research UK.

1. Floresan proteinleri ile hücre retroviral etiketleme <ol><li> 0.25 x 10 6 hücre ortalama 6-iyi Plaka retroviral ambalaj hücreleri (örneğin Phoenix) % 10 fetal sığır serumu (FBS) / DMEM çanak. </li><li> Retroviral DNA Transfect hücrelerin 48 saat sonra hücrelerin üreticinin talimatlarına göre Effectene kullanarak. </li><li> Kuyu daha sonra orta 24 saat ile iki kez durulayın, daha sonra 1.5 ml% 10 de ortalama FBS / DMEM ekleyin. </li><li> Pipetleme ve 2 ml mikrosantrifüj tüpler transfer orta 48 saat sonra doku kültürü paketlenmiş virüs toplayın. </li><li> Pelet herhangi bir hücre için 5 dakika 1600 rpm'de santrifüj uygulayın. </li><li> Temiz bir tüpe supernatant ve mağaza çıkarın -80 ° C </li><li> Retrovirally transduced hücreleri 6 iyi bir yemeğin başına 1,5 x 10 5 hücre kaplama ve nemlendirilmiş bir inkübatör 37 ° C gecede yerleştirilir . </li><li> Ertesi gün, hücreleri ve reklam ortamı çıkarın.d her kuyuya 4 ul polybrene (2 mg / ml) ile desteklenmiş virüs stokunun 1 ml. Inkübatör plakalarının değiştirin. </li><li> 5-6 saat inkübasyon sonrasında, her bir kuyunun 2 ml% 10 FBS / DMEM eklemek ve plakalar 37 ° C inbubator gecede değiştirilir. </li><li> Ertesi gün, medyanın yerini ve uygun seçici besiyerleri eklemeden önce hücreler 24 saat geçmesini bekleyin. </li><li> Konfluent (hücrelerin büyüme hızını ve verimliliğini retroviral transdüksiyon bağlıdır, ancak genellikle 4-14 gün sürer) Ne zaman,-transduced kullanarak floresan hücreler için bir referans olarak hücre ve sıralama trypsinize, toplamak ve havuz hücreleri floresans, -80 olmayan transduced hücreleri ve dondurma alikotları daha büyük ° C ileride kullanmak için. </li></ol> 2. Ters Matrigel işgali tahlil <ol><li> Yavaşça buz (Şekil 1A) tam Matrigel (yani büyüme faktörleri içeren) bir kısım Çözülme. </li><li> Once buz PBS içinde çözülmüş, seyreltik Matrigel 1:1 (başka herhangi bir ek ile birlikte2x konsantrasyonu PBS önce seyreltme tedaviler; Şekil 1B). Daha kolay işlemek için polimerizasyon önce Matrigel yapmak için, tüm plasticware (örneğin, ipuçları, tüpler, vb.) Buz olmalıdır. </li><li> Kaplanmamış birçok 8 mikron gözenek 6.5 mm çapında 24 iyi doku kültürü plakası kuyuların içine gerekli Transwells olarak yerleştirin, sonra dikkatli bir şekilde kuyuları seyreltilmiş Matrigel 100 ul pipet ve 37 ~ 30 dakika inkübe bırakın ° C katılaşmaya (Şekil 1C). </li><li> Bu süre zarfında hazırlamak, bir veya daha fazla floresan etiketli kendi normal büyüme her tedavi öncesi durum (e. g siRNA, ilaç tedavisi) hücre hattı bağlı olarak 4-1 ml başına x 10 5 hücre, hücre süspansiyonları orta (Şekil 1D). </li><li> Matrigel filtre (Şekil 1E) yukarı bakacak şekilde alt ve hücre süspansiyonu pipetle 100 ul üzerine Transwells invert katılaşmış vardır. </li><li> 24 iyi doku tabanı ile dikkatlice Transwells kapağıkültür plakası, hücre süspansiyonu (Şekil 1F) her damla ile temas. </li><li> Hücre eki (Şekil 1G) izin vermek için, 4 saat süreyle ters devlet plaka inkübe edin. </li><li> Bu süre sonrasında, plakalar sağ taraftaki yukarıya döner ve ardışık 2 x 1 ml serum serbest orta (Şekil 2A) içine batırarak her transwell yıkayın. </li><li> (Şekil 2B) gerekli olan herhangi bir ilaç ya da tedavilerin de içeren bir üçüncü Transwells bırakın. </li><li> Katılaşmış Matrigel / PBS karışımı üstüne transwell hafifçe (25 ng / ml 'e. g AGF) FBS / DMEM artı kemoatraktan% 10 ul 100 pipeti az 3-5 gün, 37 kapak ve inkübe yerine ° C,% 5 CO 2 (Şekil 2C). </li></ol> 3. Boyama ve görselleştirme <ol><li> Hücreler floresan proteinleri ifade konfokal mikroskobi önce aşağıdaki adımları atlayabilirsiniz </li><li> Taze 24 iyi yemekler ve 4 mcM pipet 1 ml Matrigel, yer Transwells işgalci görüntü floresan olmayan hücreler içinCalcein taraf dökülme ve alt ve üst leke sağlayan, her Matrigel fiş üstünde leke çözüm AM. Calcein AM (Calcein acetoxymethyl ester) bu lekeler tüm hücrelerin canlı bir hücre boya yeşil ve hiçbir fiksasyon gerektirir. </li><li> 1 saat 37 ° ° C'de% 5 CO noktası hücreleri tamamen boyanmış ve konfokal mikroskobi tarafından görüntülendi hazır olan 2 nemlendirilmiş atmosfer. </li><li> Alternatif olarak, floresan olmayan hücrelerin Matrigel işgalci sabit ve 3,9-3,5 aşağıda açıklandığı gibi boyanmış olabilir. </li><li> Yeni bir 24 plaka her transwell aktarın. Yerleşimi 1% 4 para-formaldehyde/0.2% Triton-X 100 ml. </li><li> 0.5 saat boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> Fiksatif çıkarın ve 1 ml PBS ile 3 kere yıkayın. </li><li> 100 mcg / ml RNaz kullanarak 30 dakika RNaz tedavi ile sitoplazmik RNA çıkarın. PBS ile 2 kez yıkayın. </li><li> Görselleştirme için PBS içinde sulandırılmış 0.01 mg / ml Propidium İyodür (PI) ve oda sıcaklığında da terk0.5 saat rk. PBS ile 3 kez yıkayın. Bu aşamada, PI transwell karanlık oda sıcaklığında en az 1 ay süreyle tutulabilir boyandı. </li><li> Konfokal mikroskobu hassas görüntüleme yöntemleri kullanılabilir kaynakları bağlıdır. Olmayan daldırma 20 X objektif ve optik bölümleri matrigel fişi alttan her 10-15 mikron yakalamak üzerinde artık PBS büyük lamel üzerine küçük bir miktar (hava kabarcığı sağlamak) ile ters bir konfokal mikroskop, yer transwell kullanma. Bireysel optik dilim işgali ölçüde (Şekil 3A) ölçmek veya Volocity olarak uygun yazılım (Şekil 3B) kullanılarak 3 boyutlu nesneler oluşturmak için kullanılabilir. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar Şekil 3A optik dilim Z-serisi bir örnek gösterilmiştir. Bu durumda, hücreler Calcein AM ile boyandı ve mesafe ile filtre kadar işgalci hücrelerinin sayısını azaltmak görülebilir. De, ölçümüvasion oranı Calcein, AM olumlu olumsuz her aralıkta, ya da yukarıda ayrıntılı olarak tespiti / boyama yöntemi kullanarak ve her pozisyonda PI pozitif çekirdek sayma piksel piksel analiz ederek yapılabilir. Calcein bir avantajı. Boyama PM hücre işgalinin bu 3-boyutlu rekonstrüksiyonlar işgali modu (Şekil 3B) görsel bir tasviri vererek, böyle bir Volocity olarak yazılımı kullanarak monte edilebilir. Hücreleri floresan proteinlerle ifade etiketli iseniz, o zaman her renk hücre konumları ya tarafında (Şekil 3C) veya yeniden yapılanma (Şekil 3D) aracılığıyla dilimleri yaparak görüntülenebilir 3 boyutlu rekonstrüksiyonlar görüntülenmiştir olabilir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3525/3525fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 şematik ters işgali tahlil kurma alan adımları. A) Matrigel ECM buz üzerinde çözülmüş. B) Matrigel iki kez final konsantrasyon herhangi bir ilaç tedavileri içeren PBS ile 1:1 seyreltilir. C) Transwell ekler multiwell plakaları yerleştirilir ve Matrigel her pipetlenir. D) Hücre süspansiyonlar istenilen konsantrasyonda yaptı. E) Matrigel sonra, plaka ters ve kaldırılır hücreleri transwell ekler alt filtre üzerine kaplanmıştır. F) ters pozisyonda, multiwall plaka dikkatle hücre süspansiyonu ile temas eden, transwell ekler üzerine yerleştirilir. G) Hücreler, 4 saat için filtre uymak izin verilir. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3525/3525fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 ters işgali tayini için şematik diyagramı devamı. Hücreleri yapıştırılır A) Bir kez, iki kez gevşek hücreleri çıkarmak için serum ücretsiz medya her transwell batırın. B) Yer gerektiği gibi de içeren nihai bir medya artı tedaviler transwell yıkanır. C) Medya, gerektiği gibi tedavileri ile kemoatraktan (örneğin% 10 fetal sığır serumu) içeren dikkatle Matrigel üzerine katmanlı. ent "&gt; <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3525/3525fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Ters işgali testinin sonuçları Temsilcisi görüntüleri. A) Calcein ile boyanmış hücreler Optik bölümler konfokal mikroskobu ile 15 mikron aralıklarla alınan Matrigel işgalci PM. B) İmar, yandan bakıldığında konfokal Z-serisi görüntüleri, bir yığın hücre işgali 3 boyutlu rekonstrüksiyon. Referans, 10 yayımlanmaktadır. C) Üç boyutlu yan bakıldığında Matrigel işgalci GFP ve RFP etiketli hücrelerinin yeniden inşası. D) Optik, GFP ve RFP etiketli hücreleri 3 boyutlu rekonstrüksiyon ile dilim. Referans, 10 yayımlanmaktadır.

<ol><li>Olson, M. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+actin+cytoskeleton+in+cancer+cell+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">The actin cytoskeleton in cancer cell motility.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 273-287 (2008).</li>
<li>Hoelzinger, D. B., Demuth, T., Berens, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autocrine+factors+that+sustain+glioma+invasion+and+paracrine+biology+in+the+brain+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer.+Inst%22%5BJournal%5D)">Autocrine factors that sustain glioma invasion and paracrine biology in the brain microenvironment.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 99, 1583-1593 (2007).</li>
<li>Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+perspective+on+cancer+cell+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A perspective on cancer cell metastasis.</a> Science. 331, 1559-1564 (2011).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hallmarks+of+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Hallmarks of Cancer.</a> Cell. 100, 57-70 (2000).</li>
<li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li>
<li>Hooper, S., Marshall, J. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+cell+migration+in+three+dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Tumor cell migration in three dimensions.</a> Methods. Enzymol. 406, 625-643 (2006).</li>
<li>Croft, D. R., Olson, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulating+the+conversion+between+rounded+and+elongated+modes+of+cancer+cell+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Regulating the conversion between rounded and elongated modes of cancer cell movement.</a> Cancer Cell. 14, 349-351 (2008).</li>
<li>Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-step+pericellular+proteolysis+controls+the+transition+from+individual+to+collective+cancer+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Multi-step pericellular proteolysis controls the transition from individual to collective cancer cell invasion.</a> Nat. Cell. Biol. 9, 893-904 (2007).</li>
<li>Hennigan, R. F., Hawker, K. L., Ozanne, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fos-transformation+activates+genes+associated+with+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Fos-transformation activates genes associated with invasion.</a> Oncogene. 9, 3591-3600 (1994).</li>
<li>Scott, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LIM+kinases+are+required+for+invasive+path+generation+by+tumor+and+tumor-associated+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">LIM kinases are required for invasive path generation by tumor and tumor-associated stromal cells.</a> J. Cell. Biol. 191, 169-185 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa etmek başka bir şey var.

Matrigel işgali testleri geleneksel ve alt kısmında bir filtre aracılığıyla doğru kemoatraktan indüklenen motilite ile ekstraselüler matriks proteini bir tabaka üzerine yerleştirilen hücreleri ile kurulmuştur. Invazivlik filtrenin alt kısmında kaç hücre olabilir sayılır bir fonksiyonu olarak gol oldu. Çok az bir fark ile, yukarıda açıklanan &quot;ters&quot; işgal tahlil pratik olmasına rağmen, Matrigel ile yukarı taşımak ve işgalci hücreleri görselleştirme tarafından tespit edilebilir işgali süreci hakkında daha fazla b...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifi Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> DMEM (Dulbecco&#39;nun Modifiye Kartal Orta) </td><td> Gibco </td><td> 21969 </td></tr><tr><td> Fetal sığır serumu </td><td> PAA </td><td> A15-101 </td></tr><tr><td> Penisilin Streptomisin </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td></tr><tr><td> 200 mM L-Glutamine (100x) </td><td> Gibco </td><td> 25050-032 </td></tr><tr><td> Puromycin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8833 </td></tr><tr><td> % 0.05 tripsin EDTA </td><td> Gibco </td><td> 25300 </td></tr><tr><td> Polybrene </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> AL-118 </td></tr><tr><td> Lipofectamine 2000 Reaktif </td><td> Invitrogen </td><td> 11668019 </td></tr><tr><td> 6.5mm Transwells, 8.0 mikron gözenek boyutu </td><td> Corning </td><td> 3422 </td></tr><tr><td> Komple Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354234 </td></tr> &lt;tr&gt; <td> Calcein AM </td><td> Invitrogen </td><td> C1430 </td></tr><tr><td> RNaz </td><td> Qiagen </td><td> 19101 </td></tr><tr><td> Propidium İyodür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4864 </td></tr><tr><td> Konfokal microcope </td><td> Leica </td><td> SP2MP </td></tr></tbody></table>

modelleme ve görüntüleme 3-boyutlu toplu hücre invasion

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

Kanser malignite tanımlayan ayırt edici özelliği, invazyon ve metastaz 1 . Bazı kanser türleri (E. G glioma 2), çevredeki sağlıklı doku içine lokal invazyon, hastalık ve ölüm kök nedenidir . Diğer kanserler için (e. g meme, akciğer, vb.), Tümör hücrelerinin primer tümör kitlesi hareket distal siteleri kolonize ve sonuçta organ yetmezliğine katkıda metastaz süreci, sonunda morbidite ve ölüm 3. Invazyon ve metastaz, kanser ölümlerinin 4% 90 oranında sorumlu olduğu tahmin edilmektedir . Sonuç olarak, gelişen tanı ve tedavi 5 amaçları için moleküler süreçler ve invazyon ve metastaz kritik protein arabulucular tespit yoğun ilgi olmuştur. Kanser bilim adamları için bir meydan okuma in vivo durumu yeterince benzer işgali testleri geliştirmek içindoğru hastalığı modelleme 6 etkinleştirin. İki boyutlu hücre motilite testleri işgali yalnızca bilgilendirme yaklaşık bir yönü vardır ve aynı zamanda önemli bir unsurudur hesap ekstraselüler matriks (ECM) protein remodeling yapmayız. Son zamanlarda, tümör hücresi invazyonu anlayışımız araştırma rafine ve tek tek hücreler, uzatılmış veya yuvarlak modları 7 hareket etmiş olabileceğini göstermiştir . Buna ek olarak, özellikle epitel özellikleri korumak son derece farklılaşmış tümörler kanser 8 yayılmasını hücreleri lifler, çarşaf ve kümeler halinde işgal toplu işgali katkısı büyük takdir,, olmuştur. Biz kolektif işgali 10 katkıları aday proteinlerin incelenmesi için zarif bir yöntem 9 sunuyoruz. Özellikle, farklı floresan proteinleri ifade hücreleri mühendislik ayrı havuzları, moleküler faaliyetler ve protei incelemek mümkünns aşağıdaki hücreleri gerekli olan karşı önde gelen hücreleri gereklidir. RNAi kullanımı deneysel yanı sıra toplu işgalinin farklı pozisyonlarda bireysel hücre invazyonu ilgili işlemleri sökmeye moleküler bir araç sağlar. Bu prosedürde, floresan etiketli hücrelerinin karışımları Matrigel ECM protein ile dolu bir transwell eklemek altındaki kaplama, daha sonra, filtre ve Matrigel içine &quot;yukarı&quot; işgal izin. Konfokal görüntüleme ile elde edilen üç boyutlu gösterimleri içine z serisi görüntü yığınlar, İmar lideri konumunu karşı aşağıdaki floresan etiketli hücrelerinin temsil toplu işgalci iplikçikleri ve analiz görselleştirme sağlar.

Üç boyutlu hücre dışı matriks içine tümör hücresi invazyonu modelleri daha iyi yansıtacak<em&gt; In vivo</em&gt; Iki boyutlu motilite testleri daha durum. Floresan etiketli hücreleri, işgali modları ve önde gelen karşı aşağıdaki hücreleri farklı katkıları hakkında detaylı bilgi konfokal görüntüleme ile birlikte matris işgali testleri kullanılarak elde edilebilir.

Modelleme ve Görüntüleme 3-Boyutlu Toplu Hücre Invasion

Kanser malignitesinin tanımlayıcı bir özelliği, invazyon ve metastazdır 1. Bazı kanserlerde (örneğin gliyoma 2), çevreleyen sağlıklı dokulara yerel invazyon...

Bu deneysel sistem, spesifik proteinlerin invazyon sürecine olan katkısını karakterize etmeyi amaçlamaktadır. İşleme, hücrelerin ilgilenilen floresan protein ile retroviral transdüksiyonu ile başlayın. Ayrıca transwell insertlerde matrigel proteininden 3D matriks oluşturun ve uygun dilüsyonda bir hücre süspansiyonu hazırlayın.Matrigel transwell sistemini kullanarak, test ilaçları veya tedavilerle birlikte kemo atraktanta karşı transmigration yanıtını ölçün; ardından konfokal mikroskopi ile hücre invazyonunu görselleştirme ve analiz etme işlemine geçin. Nihayetinde, sonuçlar üç boyutlu protein matrisine hücre invazyonunun boyutunu ve modunu belirleyebilir. Bu tekniğin, geleneksel Transwell invazyon analizi gibi mevcut yöntemlere göre gücü, üç boyutlu bir protein matrisine hücre invazyonu hakkında hem kantitatif hem de kalitatif veriler sağlama kapasitesidir.İş birliği yaptığım Diane Creighton, şimdi %10 FBS içeren DMEM ortamında retroviral paketleme hücrelerinin 48 saat boyunca kültüre edilmesi yöntemini gösterecek. Hücreleri, üreticinin talimatlarına uygun olarak retroviral DNA ile transfekte edin. 24 saat inkübe edin, kuyucukları besiyeri ile iki kez durulayın, ardından her kuyucu

modeling-and-imaging-3-dimensional-collective-cell-invasion

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

İnterstisyel sıvı akışı solid tümörler yüksek olan ve tümör hücre invazyonu modüle olabilir. Burada bir matris içinde gömülü hücrelere interstisyel sıvı akışı uygulayıp sonra hücre işgali üzerine etkilerini ölçmek için bir tekniği açıklar. Bu teknik, kolayca diğer sistemlerle çalışmaya adapte edilebilir.

Tümör Hücre Invasion üzerine İnterstisyel Akışkan Etkilerinin Ölçülmesi için üç boyutlu Hücre Kültürü Modeli

Kaynak: Guyon, J.,  et al. Glioblastoma için bir 3D sferoid modeli. J. Vis. Uzm. (2020)Video, tümör hücresi istilasının üç boyutlu küresel bir modelinin oluşturulmasını göstermektedir. Sferoidler, insan beyni tümör hücrelerinden oluşur ve bir kollajen matrisine gömülür. Küresel periferdeki tümör hücreleri, kollajeni parçalamak için proteazlar salgılayan ve çevredeki matrisi istila etmek için ilerleyen istilacı bir fenotip benimser.

Tümör Hücresi İstilasının Üç Boyutlu Küresel Modelinin Oluşturulması

Bu makalede, floresan daha düzeltme ve 3D-hücre kültürleri canlı görüntüleme için kullanılabilir kollajen etiketlemek için bir yöntem sunar. Ayrıca 3D ortamlarda kültür hücrelerinin endojen iskelet proteinleri görselleştirmek için optimize edilmiş bir protokol sağlar.

3D İnvaziv Kanser Hücrelerinin Sitoskeletal Örgütü ortaya

Bu makalede, meme kanseri hücre istilasını ölçmek için üç boyutlu (3D) tahlillerin kullanımı için ayrıntılı yöntemler sağlar. Özellikle, biz hücreleri istila oluşur membran bütünlüğünün kaybı incelemek için bu tür deneyleri kurmak için gerekli prosedürleri, ölçümlerini ve veri analizi gibi yöntemleri tartışmak.

Üç boyutlu (3D) Modeli Kullanılarak Meme Kanseri Hücre invazivliğinin Kantitasyonu

Bu yöntem, kanser hücresinin sferoidlerden çevredeki bir 3B matrise invazyonunu değerlendirir.  Sferoidler, asılı damla kültürü yöntemi ile üretilir ve daha sonra bazal membran malzemeleri ve tip I kollajenden oluşan bir matrise gömülür.  Spheroidlerin istilası daha sonra izlenir.

Bir Kanseri Hücre Sfero Testi 3D ortamda Invasion Değerlendirmek için

Bu iletişim kuralı hücreleri hücre microenvironment koruma sırasında bir üç boyutlu ortamda göç ve işgal yeteneklerini ölçmek için kullanılabilir bir ters dikey işgali tahlil açıklar. Bu tahlil nadir ve/veya hassas hücreler için uygundur.

Yukarı doğru hareket: Bir basit ve esnek Vitro üç boyutlu işgali tahlil iletişim kuralı

Mesane kanseri istila yönetim süreçleri biyomarker ve terapötik geliştirme fırsatları temsil eder. Burada hangi 3-b kültür tümör pulcuklarının, hızlandırılmış görüntüleme ve confocal mikroskobu birleştirmek bir mesane kanseri istila modeli mevcut. Bu teknik invaziv işlem özelliklerini tanımlamak için ve terapötik ajanlar süzmek için yararlıdır.

3-b hücre kültür sistemi istila eğitim ve Mesane kanserinde tedavi değerlendirmek için

Geçerli protokol kanser hücre göç ve gerçek zamanlı olarak tek bir platformda işgali araştırma, kolayca tekrarlanabilir ve zamanı verimli bir seçenek hücre hareketlilik ve morfoloji çalışmaya sağlayan entegre bir yöntemini açıklar.

Otomatik bir canlı hücre Imager kullanarak basit geçiş/işgali iş akışı

Tümör mikroçevre kanser büyüme ve işgali önemli bir parçasıdır. Karsinom ilerlemesini taklit etmek için biyolojik olarak alakalı bir insan matrisine ihtiyaç vardır. Bu protokol, insan leiomyoma tabanlı matris uygulayarak in vitro üç boyutlu küroid invazyonu tahlil için bir gelişme tanıtır. Protokol aynı zamanda bilgisayar tabanlı bir hücre istilası analizi sunar.

Üç boyutlu Küroid Istilası tahlil tam ınsan tümör tabanlı matris

Burada bir küresel görüntüleme cihazının üretimi için bir protokol sunulmaktadır. Bu cihaz kanser hücre sferoidlerinin dinamik veya boyuna floresan görüntülemesini sağlar. Protokol ayrıca kanser hücre invazyonunun analizi için basit bir görüntü işleme prosedürü sunmaktadır.

3D Sferoid Modelinde Zaman Çözülen Floresan Görüntüleme ve Kanser Hücre İstilasının Analizi

İstila, kanserin gelişiminde ve ilerlemesinde önemli bir biyolojik olgudur. Bu süreç, neoplastik olmayan hücreler ve tümör mikroçevresinin bileşenleri tarafından etkilenir. Bu çalışmanın amacı, üç boyutlu (3D) kültürler kullanarak in vitro olarak tümör hücresi istilasını analiz etmek için alternatif bir yöntemi tanımlamaktır.

3D Kültürlerin İn Vitro Hücre İnvazyonunu Analiz Etmek İçin Alternatif Strateji

Öğrenin, 3D Matrigel matrisi ve konfokal mikroskopi kullanarak tümör hücrelerinin invazyon davranışlarını nasıl analiz edeceğinizi. Bu yöntem, lider ve takipçi hücrelerin rollerini belirleyerek kanser ilerlemesini daha iyi anlamanıza yardımcı olur.

Modelleme ve Görüntüleme 3-Boyutlu Toplu Hücre Invasion

Daha fazla video keşfet