Name: Kültür Bulaşık A Fonksiyonel Motor Birim: Omurilik Eksplantlarından ve Kas Hücrelerinin Co-kültür (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: Keşfedin omurilik eksplantları ve kas hücreleri ko-kültürü ile fonksiyonel motor birim oluşturma yöntemini. Bu teknik sinir-kas iletişimini in vitro ortamda çalışmak için güvenilir bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışmalarımız İsviçre Ulusal Bilim Vakfı (SNF), Sistem Biyolojisi (SystemsX.ch), Muskuler Distrofi Derneği USA (MDA), Association Française contre les Miyopatiler (AFM), Birleşik Mitokondriyal Hastalık Vakfı İsviçre Girişimi tarafından desteklenmektedir (UMDF), Gebert-RUF Vakfı Nadir Hastalıklar Programı (GRF), Kas Hastalıkları (SSEM / FSRMM), Swiss Life &quot;Jubiläumsstiftung für Volksgesundheit und Medizinische Forschung&quot;, Roche Araştırma Vakfı ve Üniversitesi Araştırma İsviçre Toplum Basel.

1. Primer İnsan Kas Hücre Kültürü Hazırlama <ol><li> Eksplantasyonu-re-eksplantasyonu tekniği 4&#39;e göre insan kas hücre kültürü oluşturulması. İlk olarak, biyopsi dışı kas dokusu kaldırın. Sonra, fibroblastlar eksplantlarının çıkmaya olanak plazma, bir pıhtı 1 mm 3 kas eksplantları embed. </li><li> Gömülü eksplantları bir plazma-jelatin kaplı çanağı aktarılır ve bunları (MEM% 10 fetal bovin serumu [FBS],% 1 penisilin / streptomisin, 10 ug / ml insülin,% 25 orta 199, takviye normal büyüme ortamında büyümesine izin edilir 10 ng / ml insan epidermal büyüme faktörü [EGF], 12.5 ng / ml insan fibroblast büyüme faktörü, bir mono tabakasında [FGF]). Bu koşullar altında eksplantlarının ortaya hücreleri kas hücreleri vardır. Bu hücreler eksplantlarının uzaklaştırıldıktan sonra, bir mono tabakasında büyümeye devam edecektir. </li><li> Kültür aneurally normal büyüme ortamı içinde% 0.1 jelatin kaplı levhalar üzerine hücreleri. Hücreler olabiliraneurally kültüre ve gerekli olarak abartılıyor. Bu ko-kültürler gerçekleştirmek için 3 ile 8 arasında bir geçiş alanı olarak kas hücrelerinin kullanımı daha uygundur. Bu genç myotubes innerve önemlidir, bu noktadan sonra, ortak kültürlerin başarısız bir yüksek riske sahiptir. Ayrıca, myotubes çok büyük ve çok kalın olmamalıdır. </li><li> Innervasyon planlanan iki gün önce, plaka normal büyüme ortamında tabağı başına 500,000 hücre yoğunluğunda 35 mm doku kültür tabaklarına (ya da 6 oyuklu plakalar) üzerine kas hücreleri. Bu yoğunlukta, hücreler, bundan sonra da bir sonraki gün füzyon başlatmak için uygun konfluent, ve takip eden innervasyon günde altındadır. Bu koşullar kullanarak, myotubes optimum innervasyon ve dolayısıyla sonraki lif kasılması için doğru aşamadadır. </li><li> Ertesi gün,% 25 orta 199,% 5 FBS, 10 ug / ml insülin ve penisilin / streptomisin ile desteklenmiş% 1 MEM oluşan bir füzyon ortam ile normal büyüme ortamı yerini alır. </li></ol> 2. Isolati<html> Sıçan Embriyonik Omurilik Eksplantlarından ile ilgili Spinal kord eksplantlarının izole etmek için tüm prosedürü% 10 fetal bovin serumu (FBS) içeren Hank&#39;in dengeli tuz Çözelti (HBSS, Gibco / Invitrogen ref 14170), bir mikroskop altında yapılır. <ol><li> Bu sıçan embriyolarında farklı bir gelişme aşaması olarak ED 13 ve 14 arasında olduğunu tüm prosedürü tehlikeye atacak çok önemlidir. CO 2 ile hamile bir kadın kurban ve HBSS ortamda bütün embriyo zinciri toplamak. Her embriyo izole edin ve ötanazi için onları işten çıkarmak. </li><li> Tek parça halinde vücudun geri kalanından embriyo omurilik inceleyin ve çevresindeki kas ve bağ dokusu çıkarın. Fonksiyonel innervasyon sağlamak için omuriliği bağlı dorsal kök ganglion (DRG) tutmak için çok dikkatli olun. </li><li> Her eksplant en az 2 DRG (1 mm ile 3 eksplantları) kendisine bağlı bulunduğu bir şekilde enine her spinal kord dilim. </li></ol><html> Embriyonik Rat Omurilik Eksplantlarından ile İnsan kas hücrelerinin ove_title &quot;&gt; 3. inervasyonu <ol><li> Tek tabaka üzerinde orta ince bir tabaka bırakarak, kas hücre kültürü üzerine füzyon orta çıkarın. </li><li> Kas hücre tabakası, 35 mm çanak başına beş eşit aralıklı eksplant üzerinde dikkatle eksplantlarının yerleştirin. </li><li> Çok yavaş ekleyin, her eksplant üzerine bilge, füzyon orta bırakın. Bu eksplantları birinci yapışması ve hücreler ile temas etmesi için izin vermek için çok fazla hayatta kalmak için kas hücreleri için orta eklemek için gerekli olan, fakat değildir. Orta düzgün (çok güçlü veya çok fazla orta) ilave değilse, eksplantlarının yüzer ve kas hücreleri innerve başarısız olur. </li><li> Eksplantlarının uymaları başladığınızda, 35 mm çanak başına 2 ml füzyon orta top ve inkübatör geri çok dikkatli yemekleri koymak. </li></ol> 4. Heterolog Sinir-kas Co-kültürlerin Bakım <ol><li> Haftada iki kez füzyon orta değiştirin. </li></ol>_title &quot;&gt; 5. Temsilcisi Sonuçlar En kısa zamanda iki gün olarak innervasyon sonra, her bir eksplant çıkan ve benzeri yapılara düğmesi (Şekil 1) tarafından temsil edilen kas hücreleri, ilişkiler kurulması neurites görmek mümkündür. Gibi erken innervasyon sonra 4-6 gün gibi, birkaç bireysel liflerin sözleşme başlayacaktır. Kasılmalar sadece haftada iki kez kültür ortamı değiştirerek muhafaza, aylarca devam etmektedir. Yaklaşık 2 hafta sonra, spinal kord eksplant kendisi soysuzlar, fakat innervasyon muhafaza edilir. Bu normal bir durumdur. Sinir bileşenin bir ince tabaka kas hücre tabakasının yüzeyinde kalır. Bu sinir ağ motor ünitesi işlevselliğini korumak için yeterli olur. Eksplantlarının innervasyon sonra orta günde yüzer, bunlar bağlı asla. Kas hücre tabakası olduğunda bu oluryeterince konfluent, veya orta değil çok yaklaşık olarak ilave edilir. Bazen, eksplant yapışır ama neurites ortaya çıkacaktır. Bu büyük olasılıkla ona bağlı DRG eksikliği kaynaklanmaktadır. Yanı sıra, bu durumda, innervasyon kurulan edilmeyecektir. Eksplantlarının hala kolayca ayırmak gibi, ilk hafta çok dikkatli yemekleri işleyin. Füzyon medya alışverişi, hücre dekolmanı önlemek için en az bir hız ile damla sıvı-bilge ekleyin. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3616/3616fig1.jpg" /> Şekil 1. Omurilik eksplantları-kas hücresi gün 15 gün 1 co-kültürler.

<ol><li>Delaporte, C., Dautreaux, B., Fardeau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+myotube+differentiation+in+vitro+in+different+culture+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Human myotube differentiation in vitro in different culture conditions.</a> Biol. Cell. 57, 17-22 (1986).</li>
<li>Kobayashi, T., Askanas, V., Engel, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+muscle+cultured+in+monolayer+and+cocultured+with+fetal+rat+spinal+cord%3A+importance+of+dorsal+root+ganglia+for+achieving+successful+functional+innervation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Human muscle cultured in monolayer and cocultured with fetal rat spinal cord: importance of dorsal root ganglia for achieving successful functional innervation.</a> J. Neurosci. 7, 3131-3141 (1987).</li>
<li>Braun, S., Croizat, B., Lagrange, M. C., Warter, J. M., Poindron, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+muscular+abnormalities+in+culture+in+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Constitutive muscular abnormalities in culture in spinal muscular atrophy.</a> Lancet. 345, 694-695 (1995).</li>
<li>Askanas, V., Engel, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+program+for+investigating+adult+human+skeletal+muscle+grown+aneurally+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">A new program for investigating adult human skeletal muscle grown aneurally in tissue culture.</a> Neurology. 25, 58-67 (1975).</li>
<li>Guettier-Sigrist, S., Coupin, G., Warter, J. M., Poindron, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+types+required+to+efficiently+innervate+human+muscle+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Cell types required to efficiently innervate human muscle cells in vitro.</a> Exp. Cell Res. 259, 204-212 (2000).</li>
<li>Lefebvre, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+a+spinal+muscular+atrophy-determining+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of a spinal muscular atrophy-determining gene.</a> Cell. 80, 155-165 (1995).</li>
<li>Schrank, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+the+survival+motor+neuron+gene%2C+a+candidate+gene+for+human+spinal+muscular+atrophy%2C+leads+to+massive+cell+death+in+early+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Inactivation of the survival motor neuron gene, a candidate gene for human spinal muscular atrophy, leads to massive cell death in early mouse embryos.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 9920-9925 (1997).</li>
<li>Hsieh-Li, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">A mouse model for spinal muscular atrophy.</a> Nat. Genet. 24, 66-70 (2000).</li>
<li>Monani, U. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+centromeric+survival+motor+neuron+gene+%28SMN2%29+rescues+embryonic+lethality+in+Smn%28-%2F-%29+mice+and+results+in+a+mouse+with+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">The human centromeric survival motor neuron gene (SMN2) rescues embryonic lethality in Smn(-/-) mice and results in a mouse with spinal muscular atrophy.</a> Hum. Mol. Genet. 9, 333-339 (2000).</li>
<li>Sleigh, J. N., Gillingwater, T. H., Talbot, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+mouse+models+to+understanding+the+pathogenesis+of+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model.+Mech%22%5BJournal%5D)">The contribution of mouse models to understanding the pathogenesis of spinal muscular atrophy.</a> Dis. Model. Mech. 4, 457-467 (2011).</li>
<li>Durbeej, M., Campbell, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscular+dystrophies+involving+the+dystrophin-glycoprotein+complex%3A+an+overview+of+current+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Muscular dystrophies involving the dystrophin-glycoprotein complex: an overview of current mouse models.</a> 12, 349-361 (2002).</li>
<li>Schnabel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroscience%3A+Standard+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neuroscience: Standard model.</a> Nature. 454, 682-685 (2008).</li>
<li>Benatar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lost+in+translation%3A+treatment+trials+in+the+SOD1+mouse+and+in+human+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Lost in translation: treatment trials in the SOD1 mouse and in human ALS.</a> Neurobiol. Dis. 26, 1-13 (2007).</li>
<li>Dorchies, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+innervation+and+differentiation+of+X-linked+myotubular+myopathy+muscle+cells+in+a+nerve-muscle+coculture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul.+Disord%22%5BJournal%5D)">Normal innervation and differentiation of X-linked myotubular myopathy muscle cells in a nerve-muscle coculture system.</a> Neuromuscul. Disord. 11, 736-746 (2001).</li>
<li>McFerrin, J., Engel, W. K., Askanas, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+innervation+of+cultured+human+muscle+overexpressing+betaAPP+experimentally+and+genetically%3A+relevance+to+inclusion-body+myopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Impaired innervation of cultured human muscle overexpressing betaAPP experimentally and genetically: relevance to inclusion-body myopathies.</a> Neuroreport. 9, 3201-3205 (1998).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Kas hücre kültürlerinde genellikle birden çok hücre ve hücre tipi bağlantılar önemini recapitulate çünkü normal ve patolojik bağlamda kas hücre fonksiyonu incelemek için bir fizyolojik in vitro aracı, myologists için en ilgi biridir. Kas hücreleri için motor nöron saflaştırılmış Ayrıca Schwann hücreleri varlığında 5 verimli olmasını innervasyon için gerekli olan ve ilgili protokolü burada açıklanan (3B + özel bir dağıtım) topolojik sahiptir olmadığı için işlevsel bir motor ünitesi elde etmek için yet...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktifi Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 14170 </td></tr><tr><td> MEM </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 31095 </td></tr><tr><td> Orta 199 </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 31153 </td></tr><tr><td> Sığır fetüs serumu </td><td> Fetal Clone Perbio </td><td> SH30066.03 </td></tr><tr><td> İnsüline </td><td> Sigma </td><td> I9278 </td></tr><tr><td> İnsan EGF </td><td> Sigma </td><td> E9644 </td></tr><tr><td> İnsan FGF </td><td> Sigma </td><td> F0291 </td></tr><tr><td> Penisilin / streptomisin solüsyonu </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td></tr></tbody></table>

kültür bulaşık a fonksiyonel motor birim: omurilik eksplantlarından ve kas hücrelerinin co-kültür

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

Bir sinir bileşeni yokluğunda, hücre farklılaşması sınırlıdır ve motor nöron stimülasyon 1 eksik kendiliğinden, çünkü İnsan primer kas hücreleri tek tabaka içinde aneurally nadiren sözleşme kültüre. Bu sınırlamalar, kültürlü kas hücrelerinde birçok nöromüsküler hastalıklar, in vitro çalışma engelleyebilir. Önemlisi, tek sıralı, kültürlü kas hücrelerinin deneysel kısıtlamaları ortak kültürlerinde omurilik eksplant ile myofibers fonksiyonel innervasyonu aşılabilir. Burada, Askanas 2 tarafından geliştirilen yönteme göre farklılaşmasını ve fiber kasılması tamamlamak için açan, insan birincil kas hücreleri için etkili, uygun innervasyon elde etmek için gerekli adımları gösteren farklıdır. Bunu yapmak için, kas hücreleri hala omurilik dilim bağlı dorsal kök gangliyon ile ED 13.5 olarak sıçan embriyolarında omurilik eksplant ile birlikte kültüre edilir. Birkaç gün sonra, kas fiyle sözleşme başlar ve sonunda kas hücrelerine bağlanan bu omurilik eksplantlarının çıkıntı fonksiyonel neurites tarafından innervasyonu ile çapraz çizgili olur. Bu yapı, basit bir kültür ortamında düzenli değişimi ile, çok sayıda ay boyunca muhafaza edilebilir. Insan kas gelişimi ve innervasyon multidisipliner analiz için işlevsel bir model temsil ettiği bu paha biçilmez aracı uygulamaları çoktur. Aslında, tam bir de novo nöromusküler kurulum temel ve fizyolojik bağlamda her adımda birçok parametre kolay bir ölçüm, izin, bir kültür çanak oluşur. Birkaç örnekleri, genomik ve / veya proteomik çalışmaları anmakta co-kültürler doğrudan uygulanabilir. Her iki bileşenler farklı türlerden gelir çünkü Ayrıca, pre-ve post-sinaptik etkiler özellikle ve ayrı ayrı, nöromüsküler kavşakta değerlendirilebilirSıçan ve insan idi. Sinir-kas co-kültürü ayrıca kas veya nöromüsküler hastalıklar 3 muzdarip hastaların izole insan kas hücreleri ile yapılabilir, ve böylece aday ilaçlar için bir tarama aracı olarak kullanılabilir. Son olarak, hiçbir özel ekipman, ancak düzenli bir BSL2 tesisi bir kültür kabına fonksiyonel bir motor ünite üretmek için gereklidir. Bu yöntem, normal ve hastalık bağlamında, kas gibi nöromüsküler fonksiyon fizyolojik ve mekanik çalışmalar için nöromüsküler araştırma her iki toplum için değerlidir.

Kültür kas hücreleri innerve kas özetlemek için yetersiz bir modeli vardır<em&gt; In vivo</em&gt;. Fonksiyonel bir motor ünitesi çoğaltılabilir<em&gt; In vitro</em&gt; Rat embriyo omurilik eksplantlarındaki farklılaştırılmış insan birincil kas hücrelerinin innervasyon tarafından. Bu makale, spinal kord aşılar ve kas hücrelerinin co-kültürler kurulur açıklamaktadır.

Kültür Bulaşık A Fonksiyonel Motor Birim: Omurilik Eksplantlarından ve Kas Hücrelerinin Co-kültür

Monotaba halinde aneural olarak kültüre edilen insan primer kas hücreleri, bir sinir bileşeninin yokluğunda hücre ... nedeniyle nadiren spontan olarak kasılır.

Bu prosedürün genel amacı, in vitro ortamda fonksiyonel bir motor üniteyi yeniden oluşturmaktır. Bu işlem, insan primer kas hücrelerinin, sıçan embriyolarından izole edilmiş spinal kord eksplantları ile birlikte kültüre edilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, eksplant hala bağlıyken spinal kord implantlarının insan kas hücrelerini innerve etmesine izin verilir.Kas hücreleri tamamen farklılaşana kadar kültürle dikkatlice besiyeri beslemesi yapılır. Farklılaşmış kas hücrelerinin moleküler ve/veya hücresel fenotipi daha sonra bir dizi moleküler araç aracılığıyla değerlendirilebilir. Bu yöntemin görsel gösterimi kritiktir çünkü öncelikle, omuriliğin nasıl izole edileceğini öğrenmek zordur.Ve her şeyden önemlisi, kültür ortamını yenilikçi kas hücrelerine eklerken çok hassas olmanız gerekir. Embriyoları ED 12.5 ve ED 13.5 evreleri arasında olan gebe bir sıçanı ötanize edin.Aşama tüm prosedür için kritik olduğundan hassas davranın. Stereoskop altında, %10 FBS içeren HBSS ortamında uterusu disseke edin ve tüm embriyo zincirini toplayın; her bir embriyoyu izole ederek baş kısmını kesin. Omuriliği tek parça halinde izole edin ve çevresindeki kas ve bağ dokusunu temizleyin.Bunu yapmak için öncelikle embriyoları mikro makasla sabitleyin. Omuriliğin her iki yanından bir hat boyunca kesin ve deriyi dikkatlice soyun. Ardından embriyoyu yan tarafa yatırın ve dorsal kök ganglionu (DRG) hala bağlıyken omuriliği dikkatlice izole edin.DRG'ler omuriliğe bağlı kalmazsa fonksiyonel innervasyon gerçekleşmeyecektir. Omurilik, çevresindeki pembe bağ dokusu ve kastan daha beyazdır. DRG'leri rahatsız etmeden çevredeki dokuları dikkatlice temizleyin.İzole edildikten sonra, her bir spinal kordu en az iki DRG içeren küpler şeklinde transvers olarak dilimlemek için mikro şırınga iğnesi kullanın. Bu parçalar yaklaşık bir kübik milimetre boyutunda olacak ve artık standart bir insan kas hücresi kültürü ile ko-kültür edilmeye hazır hale gelecektir. Bu protokol, doku biyopsilerinden kültüre edilmiş insan kas hücreleri gerektirmektedir.Bu prosedürün ayrıntıları için yazılı protokole başvurun. İşleme, kas hücresi kültüründeki füzyon ortamını uzaklaştırarak ve monotabaka üzerinde ince bir ortam tabakası bırakarak başlayın. Ardından, x explanı dikkatlice kas hücresinin üzerine yerleştirin.Her bir 35 milimetrelik petri kabına, eşit aralıklarla yerleştirilmiş beş X eksplantı sığdırılabilir. Her bir x eksplantının üzerine füzyon ortamını damla damla ve yavaşça ekleyin. Füzyon ortamını çok hızlı veya çok fazla miktarda eklemeyin.Aksi takdirde x eksplantlar yüzecek ve kas hücrelerini innerve edemeyecektir. Ardından kapları çok dikkatli bir şekilde inkübatöre geri yerleştirin. Besiyeri eklemeye yavaşça devam edin.Dikkatle işlem yapıldığında, x eksplantlar yaklaşık bir saat içinde medyumda yüzmeyi bırakacak ve hücrelere yapışacaktır. Yapışma gerçekleştikten sonra, füzyon medyumu hacmini 35 milimetrelik kap başına iki mililitreye çıkarın. Gece boyunca beklendikten sonra X eksplantlar hâlâ medyumda yüzüyorsa, ya kas hücresi tabakası yeterince konfluent değildi ya da medyum eklenmişti.Yaklaşık iki. Bu X explanlar haftada iki kez asla yapışmayacaktır. Hücrelerin ayrılmasını önlemek için tüm füzyon medyasını damla damla, çok yavaş bir şekilde değiştirin.X explanlar ilk hafta oldukça kırılgandır ve kolayca ayrılabilirler. Bu çok kullanışlı bir tekniktir; çünkü inovasyon sonrası, sadece kültür ortamını ölçerek veya toplayarak ko-kültürlerin om'unu ölçebilirsiniz. Eğer moleküler araçları dikkatle seçerseniz, nelerin kastan ve nelerin sinirden geldiğini ayırt edebilirsiniz.İnnervasyonun iki gün sonrası, her bir eksplanttan nöritler çıkar ve düğme benzeri yapılarla temsil edilen kas hücreleriyle temas kurar. Nöritler çıkmadığında, muhtemelen DRG tutunma eksikliği nedeniyle innervasyon başarısız olacaktır. İnnervasyondan sonraki dört ila altı gün kadar erken bir sürede, birkaç münferit fiber kasılmaya başlar.Kasılmalar, kültür ortamının haftada iki kez değiştirilmesiyle basitçe sürdürülerek birçok ay boyunca devam etti. Beklendiği üzere yaklaşık iki hafta sonra spinal kord eksplantlarının kendileri dejenere oldu ancak innervasyonlar korundu. Kas hücresi tabakasının yüzeyinde ince bir sinir bileşenleri tabakası kaldı ve bu sinir ağı, motor ünitenin fonksiyonelliğini sürdürmek için yeterliydi.Bu tekniğin en büyük avantajlarından biri, hastalardan örnekler alma ve kontrol grubu ile hasta örneği arasındaki ko-kültürlerin fenotipini ölçme veya karşılaştırma imkanıdır. Bu prosedürü takiben, gerçek zamanlı PCR, Western blot ve immünohistokimya gibi oldukça yaygın klasik teknikleri kullanabilir ve ko-kültürlerin kas veya sinir türevi fenotipini gerçekten inceleyebilirsiniz.

a-functional-motor-unit-culture-dish-co-culture-spinal-cord-explants

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Mikro-disseke eksplantlar tekniği, iskelet kas kök hücre kaynağı olarak çocuk, yetişkin ya da embriyonik kasları proliferatif iskelet kas hücreleri izole için sağlam ve güvenilir bir yöntemdir. Benzersiz, bu hücrelerin klonal in vivo nakli için kullanılan iskelet kas kök hücre hatları üretmek için türetilmiştir.

Yetişkin ve Embriyonik İskelet, Kas Microexplant Kültür ve İskelet Kası Kök Hücre İzolasyonu

Omurilik fare embriyonik motor nöronlar izole alternatif bir yol tarif edilir. Bu yöntem, lektin düşük afinite sinir büyüme faktörü reseptör p75NTR bağlamak için aslında dikkate alır. Bu lektin tabanlı preplating p75NTR karşı spesifik antikor ile benzer bir arınma sağlar.

Fare Embriyonik motor nöronlar lektin tabanlı İzolasyon ve Kültür

Biz civciv E4 statoacoustic ganglion ve E6 omurilik eksplantlar incelemek ve kültürüne nasıl gösterilmektedir. Eksplantlarındaki 24 saat için 3D kollajen jel serum serbest koşullar altında kültüre. Neurite yanıt büyüme faktörü desteği orta ve protein kaplı boncuklar ile test edilir.

Diseksiyon ve Chick Statoacoustic Ganglion ve Kollajen Jeller Omurilik eksplantlar Kültür Neurite akıbet Tahliller

Üretimli kas dokusu hastalığı modeli olarak hem de eti için alternatif bir kaynak olarak, rejeneratif tıpta büyük bir potansiyele sahiptir. Burada fare miyoblast projenitör hücreleri ve elektrik sinyalleri tarafından uyarılması, bu durumda, bir kas yapısının mühendislik açıklanmaktadır.

Elektrik Stimülasyonu murin myoblast Progenitör Hücreler ve Uygulama Mühendislik İskelet Kası Dokular

Dilim kültürleri gen ve farmakolojik tedirginliklerin tarafından embriyo gelişiminin manipülasyonu kolaylaştırır. Ancak, kültür koşullarının normal gelişim dilim azalır ortamında devam edebilirsiniz emin olmalısınız. Biz en az 24 saat süreyle devam etmek omurilikteki normalde gelişimi kolaylaştıran bir protokol göstermektedir.

Tavuk embriyo Omurilik Dilim Kültür Protokolü

Burada in vitro propriyospinal bağlantıları işlevsel rejenerasyonu çalışma çoklu elektrot dizileri üzerinde kültürlü omurilik dilimleri dayanan bir protokol mevcut.

Çok elektrot Dizileri Yetiştirilen Organotipik Omurilik Co-kültürler Fonksiyonel Rejenerasyon incelenmesi

Aksonal taşıma motor nöron sağlığı için çok önemli bir mekanizmadır. Bu protokolde mikroakışkan odacıklar kullanılarak motor nöron aksonlarında asidik bölmelerin ve mitokondrinin aksonal naklinin izlenmesi için ayrıntılı bir yöntem sağlıyoruz.

Mikroakışkan Odacıksistemi Kullanılarak Motor Nöron Kültürlerinde Organellerin Aksonal Taşınması

Bu protokolde, kas kök hücreleri için endojen nişleriyle etkileşimlerinin çoğunu koruyan bir in vitro kültleme ve fonksiyonel analiz yöntemi tanımlanmıştır.

Yetişkin Kas Kök Hücre İşlevselliğinin Değerlendirilmesi için Tek Miyofiber Kültür Tahlil Ex Vivo

Bu makalede, 3D insan iskelet kas mikrotleri dizileri ve kas gücü ve kalsiyum elleçleme analizleri de dahil olmak üzere minimal invaziv aşağı akış in situ fonksiyon tahlilleri üretmek için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır.

İnsan İskelet Kas Mikrotissularında İskelet Kas Sağlığının Fonksiyonel Ölçümlerinin Değerlendirilmesi

fonksiyonel olarak aktif nöromüsküler kavşakların oluşumuyla sonuçlanan insan primer mezoangioblast türevli miyotüplerle birlikte insan kaynaklı pluripotent kök hücre türevi motor nöronları birlikte kült haline getirmekle ticari olarak mevcut mikroakışkan cihazlarda insan motor üniteleri üretmek için bir yöntem açıklıyoruz.

Mikroakışkan Cihazlarda Fonksiyonel Nöromüsküler Kavşaklara Sahip İnsan Motor Ünitelerinin Üretimi

Keşfedin omurilik eksplantları ve kas hücreleri ko-kültürü ile fonksiyonel motor birim oluşturma yöntemini. Bu teknik sinir-kas iletişimini in vitro ortamda çalışmak için güvenilir bir model sunar.

Kültür Bulaşık A Fonksiyonel Motor Birim: Omurilik Eksplantlarından ve Kas Hücrelerinin Co-kültür

Daha fazla video keşfet