Kuyruk Süspansiyon Testi
28 Ocak 2012
Tail-süspansiyon test farelerde antidepresan ilaç tedavilerinin etkinliğini değerlendirmek için deneysel bir prosedür olarak onaylanmıştır. Fareler altı dakika için onların kuyrukları tarafından askıya alınır ve kaçış ilgili davranışlar değerlendirilmektedir. Biz kuyruk süspansiyon test yürütülmesinde kullanılan yöntem açıklanmaktadır.
Kuyruk süspansiyon testi, çeşitli deneysel manipülasyonların antidepresan etkinliğini tahmin etmek için kullanılan yaygın bir davranışsal testtir. Bu filmde bu testin prosedürleri gösterilmektedir. Kuyruk süspansiyon testi fare için onaylanmıştır ve daha büyük kemirgenler için önerilmez.
Kuyruk süspansiyon testinde, fareler kuyrukları tarafından askıya alınır. Fare altı dakika boyunca askıda kalır. Bu süre zarfında deneğin davranışları kaydedilir.
Altı dakikalık test süresinin sonunda, bant deneğin kuyruğundan çıkarılır. Test tamamlandıktan sonra görsel kayıtlar bir bilgisayara veya video monitörüne aktarılır. Analiz için, bir gözlemci bir farenin altı dakikalık oturumun tamamı boyunca mücadele etmek için harcadığı zamanı ölçer.
Antidepresan özelliklere sahip bileşikler, mücadele etmek için harcadığım süreyi artırır. Bu, daha kısa hareketsizlik dönemleri ile yansıtılır. Örneğin, yardımcı bir antidepresan ilaç olarak klinik olarak yararlı olan duygudurum dengeleyici ilaç lityumun, kuyruk süspansiyon testinde hareketsizlik süresini azalttığını bildirmiştik.
Merhaba, benim adım Sean, Baltimore'daki Maryland Üniversitesi Tıp Fakültesi Psikiyatri Bölümü'nde Dr.Todd Gould'un laboratuvarından. Merhaba, ben aynı laboratuvardan Chantel. Bu videoda size kuyruk süspansiyon testini nasıl yapacağınızı ve puanlayacağınızı göstereceğiz.
Kuyruk Süspansiyon testi, antidepresan tedavilerin potansiyel etkinliğini değerlendirmek için kullanılır. Şimdi laboratuvara gidelim ve size deneyin nasıl çalıştırılacağını gösterelim. Zorunlu olmasa da, özel olarak tasarlanmış kuyruk süspansiyon kutusu kullanıyoruz.
Bu test için. Kuyruk süspansiyon kutumuz, her biri tek bir fare için ayrılmış dört bölmeye ayrılmıştır. Bölücüler, test sırasında farelerin birbirlerini gözlemlemesini engeller.
Bununla birlikte, fareleri askıya almak için bir raf veya başka bir yapı kullanmak mümkündür. Kuyruk süspansiyonu test kutusunun boyutları, farelerin kenarlara ulaşmasını ve tutunmasını önlemek için seçilmiştir. Deneye başlamadan önce, yeterince bant parçası kesin ve kuyruğa yapışması için kullanılacak parçayı işaretleyin.
Laboratuvarımızda 17 santimetrelik bant parçaları kullanacağız. Bu bant parçasının sonundan iki santimetre uzakta işaretlenmeli ve kuyruğa yapışmak için kullanılacaktır. Kuyruğu bu iki santimetrelik kısmın ortasına yerleştiriyoruz.
Kuyruk süspansiyonu test kutusunu ve video kamerayı konumlandırın. Hayvanları tanıtmadan önce, kutu önceki konulardan kalan kokuları nötralize etmek için sterilize edici bir çözelti ile iyice temizlenmelidir. Laboratuvarımızda, renk dışında her yönüyle aynı olan iki farklı kuyruk süspansiyon kutusu kullanıyoruz.
Albino fareler için koyu gri bir kutu, video kayıtları için iyi bir kontrast sağlar. Daha koyu renkli fare türleri için beyaz bir kutu uygundur. Beyaz gürültü makinesini çalıştırın.
Aralıklı sesleri maskelemelidir. Alışmak için fareleri prosedür odasına getirin. Odadaki koşullar sabit tutulmalı ve gürültüden, ışık seviyelerindeki değişikliklerden ve diğer olası aksaklıklardan arındırılmalıdır.
Bu süre genellikle en az bir saattir. Alışma süresi sona erdiğinde, belirli fare suşlarının kuyruklarına tırmanmasını önlemek için test devam edebilir. Kuyruk süspansiyon testi sırasında kuyrukların üzerine yerleştirdiğimiz plastik silindirler kullanıyoruz.
Bu silindirler, test sırasında kuyruklarının tabanında durur. Laboratuvarımızda dört santimetre uzunluğunda, bir santimetre çapında ve 1,5 gram ağırlığında plastik silindirler kullanıyoruz. Tırmanmayı önlemek için plastik silindirler kullanılıyorsa, bant uygulanmadan önce kuyruklara yerleştirilmelidir.
Kuyruğun en ucuna, kuyruğun iki ila üç milimetresi bandın dışında kalacak şekilde bant uyguluyoruz. Bandı ev kafesindeki farelerin kuyruklarına yapıştırın. Bandın işaretli ucunu kullanın ve bandın kuyruğa yapıştığından ve kendi kendine geri döndüğünden emin olun.
Bant uygulandıktan sonra, farklı hayvanlara takılan bandın dolaşmasını önlemek için her fareyi kafesin duvarlarına sabitleyin. Bu işlemi hızlı bir şekilde tamamlayın. Aksi takdirde, fareler gereksiz strese maruz kalacaktır.
Kayıtlar, hayvanlar askıya alınmadan önce başlatılmalıdır. Bandın serbest ucunu, tedavi grupları arasında dengelenecek bir sırayla ve kamera görüşünü engellemeyecek şekilde askı çubuğuna yerleştirerek hayvanları askıya alın. Fareler birer birer askıya alındığından, her hayvanın test için biraz farklı bir başlangıç zamanı vardır.
Her fareyi tam olarak askıya alma süresinin başında puanlamaya başladığınızdan emin olun. Kamera görüşünü engellememek önemlidir. Kuyruk süspansiyon seansının tamamı engellenerek puanlanacağından, kamera görüntüsü eksik verilere yol açabilir.
Tüm bant uçlarının aynı uzunlukta gevşeklik ile süspansiyon çubuğuna dik olduğundan emin olun. Her konu için zamanlayıcıyı başlatın. Kuyruk süspansiyon testi altı dakikadır.
Altı dakikalık test süresi sona erdiğinde, her kuyruğun ucundaki bandı çıkarın ve fareleri ev kafeslerine geri koyun. Test sonunda konu bilgileri video kaydına alınmalıdır. Fareler koloni odasına geri gönderildikten sonra, test kutusu iyice temizlenmeli ve bir sterilizasyon solüsyonu ile silinmelidir.
Artık testi bitirdiğimize göre, davranışları puanlamayı tartışacağız. Kuyruk süspansiyon testi puanlanırken tipik olarak değerlendirilen tek değişken, hayvanların hareketsiz olduğu zamandır. Hareketsizlik süresi elde etmek için, farelerin hareketli olduğu süreyi ölçeceğiz ve bunu altı dakikalık test süresinden çıkaracağız. Testin altı dakikasının tamamını puanlayacağız.
İlk olarak, gözlemcinin harcanan her fare zamanı için yalnızca bir hayvana odaklanmasına izin vermek için değerlendirilmeyen fareleri ele alıyoruz. Mobil, bir gamepad cihazı tarafından kontrol edilen bir ekran kronometresi ile ölçülür. Burada, gördüğünüz gibi, aynı anda kontrol edilen iki ayrı ekran kronometresi var.
İlk kronometre 360 saniyeden geriye doğru sayar ve gözlemciye test süresini gösterir. İkinci kronometre, nesnelerin hareket halinde kaldığı süreyi ölçer. Fark edebileceğiniz gibi, ikinci kronometre ilk kronometre tarafından kapsanır ve gözlemci tarafından yalnızca milisaniye ondalık sayıları görülebilir.
Bu sayede gözlemci, kronometrenin sayım yapıp yapmadığını görebilecek, ancak puanlama tamamlanana kadar toplam hareketlilik süresini göremeyecektir. Bunu, gözlemci yanlılığının sonuçları etkilemesini önlemek için yapıyoruz. Fareler, özellikle seansın başında, kaçışla ilgili davranışlar gösterirler.
Bu davranışlar, aparatın duvarlarına ve süspansiyon çubuğuna ulaşmaya çalışmayı, vücudun güçlü sallanmasını ve uzuvların koşmaya benzer hareketlerini içerir. Bu hareketler açıkça hareketlilik oluşturmaktadır. Bununla birlikte, test ilerledikçe hareketler daha ince hale gelir.
Laboratuvarımızda, ön bacaklarla sınırlı olan ancak arka bacakların herhangi bir hareketi olmayan küçük hareketleri hareket kabiliyeti olarak saymıyoruz. Buna ek olarak, önceki hareketlilik nöbetleri sırasında momentum kazanımından kaynaklanan sarkaç benzeri salınımlar hareketlilik olarak kabul edilmez. Şimdi gerçek bir kuyruk süspansiyon testi seansının puanlamasını görelim.
Genellikle hareketlilik süresi değil, hareketsizlik süresi rapor edilir. Hareketsizlik süresi, 360 saniyelik test süresinden toplam hareketlilik süresinin çıkarılmasıyla hesaplanabilir. Puanlama. Kuyruk süspansiyon testi eğitim ve pratik gerektirir.
Dahili bir laboratuvar standardı oluşturmak ve yeni gözlemcileri yüksek bir güvenilirlik seviyesine ulaşana kadar eğitmek önemlidir. Bu yazıda, kuyruk süspansiyon testinin nasıl yapıldığını ve puanlandığını açıklıyoruz. Gelecekteki deneylerinizde iyi şanslar.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Kuyruk askılama testi, farelerde ilaç tedavilerinin antidepresan etkinliğini değerlendirmek için kullanılan valide edilmiş bir davranışsal prosedürdür. Bu test sırasında fareler altı dakika boyunca kuyruklarından askıya alınır ve kaçışla ilgili davranışları kaydedilir.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Davranışsal nörobilim
- Psikofarmakoloji
- Depresyonun hayvan modelleri
Arka Plan
- Kuyruk süspansiyon testi, antidepresan etkileri değerlendirmek için araştırmalarda yaygın olarak kullanılır.
- Bu test özellikle farelerde kullanım için valide edilmiştir ve daha büyük kemirgenler için uygun değildir.
- Çeşitli deneysel manipülasyonların etkinliği hakkında bilgiler sağlar.
- Test sırasındaki davranışsal gözlemler, çaresizlik seviyesini veya kaçma isteğini gösterebilir.
Çalışmanın Amacı
- Kuyruk askılama testi prosedürlerini göstermek.
- Testin, antidepresan etkinliğinin güvenilir bir ölçümü olarak doğrulanmasını sağlamak.
- Farelerdeki davranışsal yanıtları değerlendirmek için standardize edilmiş bir yöntem sunmak.
Kullanılan Yöntemler
- Fareler altı dakika boyunca kuyruklarından asılırlar.
- Süspansiyon süresince davranışsal tepkiler kaydedilir ve analiz edilir.
- Test, ruh hali ve anksiyete seviyelerini belirten kaçışla ilgili davranışları değerlendirir.
- Tutarlılık ve güvenilirliği sağlamak için standardize edilmiş prosedürler izlenir.
Ana Sonuçlar
- Test sırasında toplanan davranışsal veriler, antidepresan tedavi sonuçlarıyla ilişkilendirilebilir.
- Test, çeşitli ilaçların ruh hali üzerindeki etkilerini etkili bir şekilde ayırt eder.
- Sonuçlar, hayvan modellerinde depresyonun ve tedavi etkinliğinin anlaşılmasına katkıda bulunur.
- Standartlaştırılmış sonuçlar, yeni antidepresan tedavilerinin geliştirilmesine yardımcı olabilir.
Sonuçlar
- Kuyruk askılama testi, farelerde antidepresan etkinliğini değerlendirmek için değerli bir araçtır.
- Araştırmacıların tedavilere verilen davranışsal yanıtları değerlendirmeleri için güvenilir bir yöntem sunar.
- Bu testin sürekli kullanımı, depresyonun ve farmakolojik tedavilerinin anlaşılmasını geliştirebilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Yönetici Endüstriyel Uygunluğu
Kuyruk asma testi, preklinik modellerde antidepresan benzeri etkinliğin değerlendirilmesi için standartlaştırılmış bir davranışsal çıktı sağlayarak, MSS-aktif bileşiklerin erken evre hedef doğrulamasını ve mekanistik risk azaltma süreçlerini destekler. Davranışsal çaresizliğin bir göstergesi olarak kaçış odaklı davranışları nicelleştirerek bu analiz, duygu durum bozukluğu endikasyonlarında öngörücü güvenle potansiyel terapötiklerin yüksek kapasiteli taramasına olanak tanır. Bu analiz, farmakolojik modülasyonu antidepresan etkinliği ile ilgili nicelleştirilebilir davranışsal çıktılarla ilişkilendirerek, keşif süreçlerindeki devam/dur kararlarına bilgi sağlar.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Duygu durum düzenlemesinde rol oynayan monoaminerjik ve glutamaterjik yolaklarla ilgili terapötik hipotezleri sorgular.
- Operasyonel Değer: Hareketsizlik süresindeki doz yanıtlı değişiklikler aracılığıyla hedeflerin fonksiyonel validasyonunu sağlayarak, hedef etkileşimindeki yanlış pozitifleri azaltır.
- Öngörü Değeri: Birden fazla kemotipte davranışsal çaresizlik üzerinde kalıcı etkileri olan bileşikleri belirleyerek portföy önceliklendirmesini destekler.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Analiz Hazırlığı: Otomasyona ve plaka tabanlı tarama formatlarına uygun, zamana dayalı nicel hareketsizlik metrikleri sağlar.
- Tekrarlanabilirlik: Dahili güvenilirlik eşikleri karşılandığında, standartlaştırılmış süspansiyon süresi ve skorlama protokolleri gözlemciler arası değişkenliği minimize eder.
- Ölçeklenebilirlik: Bileşik kütüphanelerinin paralel değerlendirmesi için çok bölmeli test kutuları ve video takip sistemleri ile uyumludur.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Hastalıkla İlişkisi: İnsan depresyon semptomatolojisi ile yapı geçerliliği olan davranışsal çaresizlik yapılarını modeller ve translasyonel biyobelirteç uyumunu destekler.
- Preklinik Süreklilik: Erken evre bir davranışsal tarama sağlayarak, hedef doğrulama ile kronik stres modellerindeki etkinlik testleri arasında köprü kurar.
- Risk Ayarlı İlerleme: Araç kontrollerine kıyasla hareketsizlikteki istatistiksel olarak anlamlı azalmalara dayalı "devam/dur" kararlarına olanak tanıyarak, sonraki aşamalardaki yatırım riskini azaltır.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Kuyruk askılama testi; hedef hipotez testinden öncü bileşik tanımlamaya ve ardından preklinik etkinlik değerlendirmesine kadar uzanan keşif sürecine uygundur; özellikle davranışsal çaresizliğin ölçülebilir bir son nokta olduğu MSS depresyon endikasyonları için değerlidir.
- Keşif Biyolojisi: Duygu durumunu düzenleyen devrelerin farmakolojik veya genetik manipülasyonlarına verilen davranışsal yanıtları ölçerek mekanistik hipotezleri test eder.
- Tarama: Doz-yanıt çalışmalarında tedavi grupları arasında karşılaştırma yapılmasına olanak tanıyan, analize hazır çıktılar (hareketsizlik süresi) sağlar.
- Analitikler: İstatistiksel karşılaştırma ve etki büyüklüğü hesaplamasına uygun, sürekli ve nicelendirilebilir veriler (saniye cinsinden hareketsizlik süresi) üretir.
- Translasyonel Araştırma: Klinik son noktalarla ilgili temel semptomatoloji alanlarını değerlendirerek, psikiyatrik bozukluklar için hayvan modellerine yönelik FDA kılavuzlarıyla uyum sağlar.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Motivasyon, ödül ve affektif işlemleri içeren endikasyon alanları genelinde uygulanabilir, aktarılabilir bir davranışsal platform oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Moleküler modülasyonu etolojik olarak ilgili davranışsal çıktılarla ilişkilendirerek hedef doğrulamasındaki öngörüsel güveni artırır.
- Operasyonel Değer: Standartlaştırılmış eğitim protokolleri ve puanlayıcı güvenilirlik kriterleri aracılığıyla tekrarlanabilirliği geliştirir.
- Stratejik Değer: Davranışsal etkinlikten yoksun bileşiklerin erken aşamada elenmesini sağlayarak sermaye verimliliğini artırır.
- Portföy Etkisi: Davranışsal çaresizlik üzerinde doza bağımlı ve tekrarlanabilir etkileri olan bileşikleri tanımlayarak riskle uyumlu önceliklendirmeyi destekler.
Uygulama Hususları
- Hareketliğe karşı hareketsizliğin doğru şekilde puanlanmasını sağlamak için kemirgenlerle çalışma ve etogram yorumlama konularında davranışsal nörobilim uzmanlığı gerektirir.
- Karıştırıcı değişkenleri en aza indirmek için video kayıt altyapısına ve kontrollü çevresel koşullara (ışık, ses, koku) bağlıdır.
- Tarama kampanyalarında uygulanmadan önce, puanlama kriterlerinin ekipler arası standardizasyonunu ve değerlendiriciler arası güvenilirlik testlerini gerektirir.
- Kuyruk silindirleri gibi mekanik müdahaleler gerektiren, fare suşlarına özgü davranışlar (örneğin C57BL/6'da kuyrukla tırmanma) için adaptasyon değerlendirmeleri içerir.
- Aparat boyutu ve davranışsal geçerlilik nedeniyle farelerle sınırlıdır; önemli bir yeniden tasarım yapılmadan sıçanlara veya kemirgen olmayan türlere ölçeklendirilemez.
